基于部分酸水解-亲水作用色谱-质谱的黄芪多糖结构表征.pdfVIP

第 12期 梁 图，等：基于部分酸水解一亲水作用色谱一质谱的黄芪多糖结构表征 ·1307· massspectrometry(MS)；polysaccharides；Astragalus；characterization 糖类化合物是能量的主要来源 ，除了提供能量 ， 酸水解的过程进行深入研究 ，考察酸水解 的影响 因 研究发现糖类化合物在人生命过程中发挥着至关重 素 (包括酸浓度 、水解温度和时间等)，严格控制水 要的作用 ，对人体生理活动产生各种影响。因此 ，以 解程度 ，保证重复、稳定地得到特征性的寡糖片段 。 糖类化合物为基础的糖类药物成了制药公司和生物 对于得到的多个特征性寡糖 片段 ，需要采用合 技术公司长期关注的焦点。多糖是糖类化合物的一 适的方法对其进行分离分析。而糖类化合物 的分离 种 ，在过去的几十年中，植物性多糖特别是来 自中药 和检测 ，也是糖学研究的难点 问题之一。糖类化合 的水溶性多糖 ，由于其具有广谱治疗和低毒性特点， 物结构 中包含大量的羟基 ，极性大 ，在传统的反相液 引起了广泛关注。从人参 、三七 、黄芪、冬虫夏草 、当 相色谱 固定相上很难保留，往往在死时间就被洗脱 归 、灵芝等中药 中提取 的多糖 具有免疫调节 、抗肿 下来 ，难以得到有效分离。所 以大多数的反相液相 瘤 、抗氧化 、抗病毒 、抗炎等生物活性 ，使之成为天然 色谱法都需要使用衍生试剂对糖类化合物进行衍 药物及保健品研发 中的重要组成部分。虽然有不少 生，以增加其在反相色谱柱上 的保 留和提高检测灵 的中药多糖已应用于临床 ，但 由于其化学组成不明 敏度 。衍生步骤无疑增加 了实验时间和方法 的 确，质量很难控制 ，造成药效重复性较差 ，不符合 国 复杂程度。高效 阴离子交换色谱一脉冲安培检测法 际规范 ，因而也难 以在 医药领域 占主要地位。为 了 适用于糖类化合物 的直接分析 。但该方法使用 使国际社会更加广泛地接 受多糖药物在 “自然疗 高浓度 、高pH 的非挥发性钠盐 ，对系统要求较高 ， 法”方面的价值 ，需要发展简单而可靠 的分析方法 并且不能直接与质谱联用 。此外 ，研究发现亲水作 用于 中药多糖 的表征。然而 ，多糖结构复杂且相对 用色谱 (HILIC)适合用于糖类化合物 的分离 。’。 分子质量 巨大，其表征是一个大的挑战。 HILIC使用极性分离材料为固定相 ，水溶性有机溶 由于多糖 的活性与多糖 的相对分子质量 、单糖 剂为流动相 ，克服 了传统反相色谱对糖类化合物保 组成 、构型 、糖苷键位置及三级结构相关 ，所 以可使 留不足的弱点。同时，HILIC方法使用高 比例 的有 用色谱及光谱学方法检测 中药多糖 的结构特点，对 机溶剂和挥发性的缓冲盐 ，与质谱有好的兼容性 ，解 其进行表征 ¨。虽然获取结构信 息是 明确表征多 决了离子交换色谱不能与质谱直接联用的问题 。 糖的有效手段，但这个过程需要耗费大量精力 ，同时 本文选择 中药黄芪为研究对象 ，发展基于部分 需要数量较多的多糖纯品，过程复杂 、困难和耗时。 酸水解一亲水作用色谱 的黄芪多糖表征方法 。首先 在多糖分析 中常使用蒽酮一硫酸法或苯酚一硫酸法等 对影响黄芪多糖部分酸水解 的各种 因素进行优化 ， 测定多糖含量 ，也可作为多糖表征的方法之一 ，多糖 建立黄芪多糖部分酸水解方法 ，得 到特征性 的寡糖 含量的变化可反映出不同产地 、不 同采收时期 、不同 片段 ；然后使用亲水作用色谱方法与质谱方法联用 栽培环境等方面的差异 。但该方法 的选择性较 对黄芪特征寡糖片段进行分离和结构表征，获取黄 差 ，不能有效鉴别 出多糖制 品中的一些掺假 品 ； 芪多糖组成