用HB-H-7树脂吸附内毒素与炎性细胞因子的实验研究.pdfVIP

用HB—H一7树脂吸附内毒素和炎性细胞因子的实验研究 天津市第三中心医院天津市肝胆疾病研究所 卫生部人工细胞工程技术研究中心(300170) 李涛王军田爽骆力群杜智 摘要 目的通过体外实验探讨HB—H．7树脂吸附内毒素及炎性细胞因子的有效性和安全性。方 法静态吸附实验：树脂与内毒素阳性病人血浆按1：10比例(体积比)混合，置37℃恒温水浴震荡2 小时，震荡前后测定血浆内毒素、炎性细胞因子、蛋白质和电解质浓度，计算吸附率；动态吸附实 验：将HB．H．7树脂5ml置入一自制灌流器中，取内毒素阳性病人血浆50ml，以输液泵控制血浆流速为 浓度，计算吸附率并与静态吸附实验进行比较。结果liB．H．7树脂吸附后，血浆中的内毒素和炎性细 率有明显提高(P0．05)。结论HB．H．7树脂对内毒素及炎性细胞因子有明显吸附效果，对蛋白质 和电解质无明显影响，可以进行下一步体内研究。 起，是现代医学面临的一个常见而复杂的难题，它对全身炎症反应综合症(Systemicinflammatory response organdysfunction 而改善感染症状。 本实验通过观察体外血浆灌流吸附过程中血浆中内毒素、炎性细胞因子、蛋白质及电解质的变 化，来检验liB—H一7吸附树脂吸附内毒素、炎性细胞因子的有效性、安全性。 材料与方法 1．1材料和试剂 FIB．H．7吸附树脂由天津市紫波公司提供 Na0H(分析纯) HCI(分析纯) 无水乙醇(分析纯) 经血浆置换获得的内毒素阳性患者新鲜血浆标本 1．2实验仪器 TN一100型托盘扭力天平(上海市第二太平仪器厂) HZS．H型水浴恒温振荡器(哈尔滨东联有限公司) Baxter Flo-Gard6201灌流泵 ·102· TOSHIBATBA120一RF全自动生化分析仪 NOVA l“电解质分析仪 TL．6000电热恒温水箱江苏姜堰天力医疗器械有限公司 MB．80微生物快速动态检测仪 BIO-RAD 680炎性细胞因子检测仪 1．3吸附剂预处理： 1)准确量取树脂5lIll，以1NNa0H浸泡24+时，以三蒸水洗涤数次，洗净Na0H。 2)以IN HCL浸泡24+时，以三蒸水洗数次，洗净HCL。 3)以无水乙醇浸泡24小时，4-6d时更换一次，水洗数次，洗净乙醇。 4)以三蒸水煮沸1／J时，水洗数次，洗净至无溶出物。 1．4静态吸附实验 将水浴振荡吸附的方法定义为静态吸附实验。静态吸附实验：准确量取4ml树脂，用滤纸吸干表 面水分，置于干燥棕色三角瓶中，按1：10比例(体积比)加入内毒素阳性病人血浆，于37C恒温水浴 振荡器中以140r／min速度振荡2／J,时，于振荡前后吸管吸取血浆样本，测定内毒素、蛋白质和电解质 浓度，计算2d时吸附率，吸附率L=(C0-C)／COX100％(CO为吸附前内毒素浓度；C为吸附后内毒素浓 度)。实验重复10次。 1．5动态吸附实验 示连接管路，以输液泵控SfJnfn浆流速为4ml／min进行血浆灌流，灌流时间为2小时，灌流前及灌流30分 钟、60分钟和120分钟取样，测定血浆内毒素浓度，计算吸附率。见图l。 取样点 图1体外循环示意图 1．6灌流器制备 用一次性输血器、输液器以及透析器管道制成微型灌流器。中间吸附罐容量为7．5ml，装入吸附 剂5．0ml。两端以100目滤网封装，加压确认无泄漏，使用前用紫外线照射灭菌及用肝素纳盐水冲管。 结果 2．1HB—H一7吸附剂对血浆内毒素、炎性细胞因子的影响 灌流前后，血浆内毒素、炎性细胞因子均明显下降，至灌流结束，内毒素吸附率达99．9％ necrosis (P0．05)；肿瘤坏死因子一a(tumorfactor-Q，TNF-Q)下降55％(Ⅻ．05