人骨髓基质干细胞体外诱导为成骨细胞的实验研究.pdfVIP

维普资讯 江西 中医学 院 学报2007年2月第 19卷 第 1期 J0URNALOFJIANGXIUNIVERSITYOFTCM2007Vo1．19No．1 人骨髓基质干细胞体外诱导为成骨细胞的实验研究 ★ 吴云刚 (浙江省温州医学院一附院骨伤科 温州325000) ★ 张志平 (江西省南昌市第一医院骨科 南 昌330008) 摘要：目的：探讨体外培养的人骨髓基质干细胞 (1aBMscs)诱导分化为成骨细胞的方法。方法：抽取骨髓，用梯度离心法分离单 个核细胞，用含 10％胎牛血清的DMEM普通培养基培养，传代后改用含 甘油磷酸钠、维生素C和地塞米松的条件培养基培 养，用相差显微镜下观察细胞形态，钙钴法碱性磷酸酶染色，VonKossa法钙结节染色及细胞 内ALP含量测定。结果：形态学 观察、碱性磷酸酶染色、钙结节染色及细胞 内ALP含量测定均表明，hBMSCs．经条件培养基培养后诱导的细胞具有成骨细胞 的形态学及生物学特性。结论：hBMSCs体外经含B一甘油磷酸钠、维生素C和地塞米松的条件培养基培养可诱导为成骨细胞。 关键词 ：骨髓基质干细胞 ；成骨细胞；碱性磷酸酶 中图分类号：Q813 文献标识码 ：A ExperimentsonhBMSCsinducedtodifferentiateintoosteoblastsinvitro w u Yun-gang ‘，ZHANG Zhi-pingz 1．TheFirstAffiliatedHospitalofWenzhouUniversity，Wenzhou325000 2、NanchangFirstHospital，JiangxiProunnce，Nanchang330006 Abstract：Objective：ToinvestigatehBMSCscanbeinducedtodifferentiateintoosteoblastsinvitro．Methods：ThehBMSCsweresepa— ratedbygradientcentrifugationonPerocll，culturedwithordinaryculturemde ium andinducde byconditionalculturemedium ．The cellsculturde withordinaryandocnditionalculturemde ium wereexaminde bymicroscopy，ALPstaining，Von—KossastainingandALP assay．Results：Microsocpy，ALPstaining，Von—Ko~sastainingandALPassayallshow thatthecellsculturedwithocnditionalculture medium havethecharacteristicsandtheactivityoftheosteoblasts．Conclusion：hBMSCscanbeinducedtodifferentiateintoosteobl~ts inocnditionalcuIturemedium invitro． Keywords：Bonemarrow stromalcell；Osteoblast；Alkalinephosphatese 骨髓基质干细胞具备多向分化的潜能，许多研究证明， 消化、传代。 骨髓基质干细胞具有向成骨细胞分化的能力，具有成骨潜 2．2 体外成骨的诱导 根据实验设计，当第 3代的hBMSCs 能。本实验通过体外培养人骨髓基质干细胞 (hBMSCs)，加 细胞贴壁生长达到 70％～80％融合时，加入含地塞米松 (5 入含地塞米松、磷酸甘油钠和维生素 C的成骨条件培养 nmol／L)、p磷酸甘油钠 (10mmol／L)和维生素C (50／zmol／ 液，诱导分化成骨细胞 ，并采用碱性磷酸酶染色(钙钴法)、钙 L)的DMEM成骨条件培养液，制成细胞悬液，按 1×10 ／cm 结节染色(Von—Kossa法)及细胞 内ALP含量检测进行成骨 的密度接种 75cm 的培养皿 ，置 37℃、5％co2的培养箱培 细胞鉴定。