山羊痘病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立和应用.pdfVIP

反刍动物疾病专题 囝 475 2．5病毒滴度测定结果 经统计检验，针对NSP4基因的shRNA显著降低BRV病毒滴度，可阻断BRV增殖。 3．讨论 RNAi技术的特点是特异性高、作用强、操作简单，是一个潜在的、强有力的抗病毒武驯峨ul。 该技术已在白血病、艾滋病、丙型肝炎治疗研究中取得一定进展【lz．-4】。同时，已有多种病毒如AⅣ、 轮状病毒的NSP4蛋白由基因10编码，在致病机理方面扮演重要角色。NSP4可与轮状病毒外壳 蛋白VP4和VP7寡聚化Il51，并且NSP4的2个N．2联高甘露糖寡糖残基在与轮状病毒外壳蛋白的结合 过程中发挥重要作用[16-181从而形成具有感染性的病毒粒子。本研究以NSP4基因为靶基因，依据 细胞病变及牛轮状病毒成熟粒子的形成。上述结果表明，shRNA是通过特异性地沉默NSP4基因的表 达进而抑制了病毒的增殖。 本研究获得的RNAi．H1．89在细胞水平上具有高效的BRV抑制特性，若要用于生产中，尚需进行 乳鼠及新生犊牛的体内验证实验和中试。RNAi．H1．89是以重组慢病毒的形式存在的，可以采用先接 种动物，然后BRV攻毒，来检测其作为预防性生物治剂防控BRV引起腹泻的可能性，或者当BRV引 起的腹泻发生时，再接种RNAi—HI．89，检测其是否可以作为BRV特异性的治疗制剂使用，应具有良 好的应用前景。然而，慢病毒载体系统用于临床应用可能会存在安全性的问题，也可以采用其它载体 系统或靶向系统制备出新型的lⅢ越生物制剂，为BRV的防控提供新的手段。 参考文献(略) T010054 程振涛韬，岳筠2p李永明垆，许乐仁妒，王开功啦，周碧君1,2文明坊 号)：贵州省农业委员会科技计划项目，编号(2009-09h高层次人才科研条件特助经费项日【亿UF．200606】。 ¨作者简介：程振涛(1979．)．男，山东临沂人，博士．主要从事动物细胞生物学与分子生物学研究． ¨·通信作者l 许乐仁。李永明，TvI：0851·8298078。Email：xuleren@yahoo．COrn． 476o201 o年学术年会 物材料进行GPV拔酸检测．结果表明，构建的FQ--PCR具有良好的敏意性、特异性，稳定性和临床应用性．该方法的建 立为山羊痘临床快速高效的诊断和山羊痘病毒感染羊只的发生、发展夏转归研究提供—种重要的手段． 关键词：山羊痘病毒，TaqMan-MGB撂针，荧光PCR。建立，应用 and of Real-time PCR Quantitative DevelopmentApplicationTaqMan-MGB fortheDetectionofGoatPoxVirus Assay Zhentao Xul 1．-，Jun Li坦，Lerenp， Cheng Yuel，Yongming Zhoul,2,Wen KaigongWang。”，Bijun Min91,2 (1InstituteofAnimalDisease。Guizhou University,Guizhou550025； Guiyang of 2 Animal 550025) College Science，GuizhouUniversity,Gulzhou