栀子遗传多样性和遗传分化的RAPD分析.pdfVIP

民族植物学和药用植物 A 栀子遗传多柱Ⅱ生及遗传分化晌RPD分析’ 栀子(Gardeniajasminoides 灌木，其果实具有泻火除烦、清热利湿、凉血散淤的功能。主要用于热病心烦、目赤、黄疸、热 淋尿涩、吐血、外治扭伤肿痛[¨。从栀子果实中可提取的栀子黄色素[2]和栀子蓝色素[3]，是 较好的天然着色剂。日本每年消耗的栀子黄色素达320t，而且需求量在不断增加[4]。目 前，由于市场需求量的增大，野生资源逐年减少，药材市场上出售的多为栽培栀子。自汉代 栽培栀子以来已有2000多年的历史，品种选育的不断进行加之野生资源的减少，栀子遗传 多样性受到极大影响，造成病虫害发生较为严重。此外，栀子为多年生植物，长期生长过程 中受地理环境的影响产生了不少遗传分化。本研究利用RAPD技术对栀子8个居群92个 个体的遗传多样性进行研究，并对居群问的遗传关系进行初步的探讨，为这一药用植物的道 地性研究提供依据，以便更好地开发、利用和保护现有的遗传资源。 1材料与方法 1-1试验材料 材料采集于2004年7月至8月间，此时秋季新枝刚抽出，采集幼嫩的叶片用于DNA 提取。采样在江西、湖南、河南各居群间进行(见表1)。随机采集若干健康幼嫩叶片，经硅 胶迅速干燥后，带回实验室，置于--80℃超低温冰箱保存备用。 表1取样的地理位置 of Table1 location sites Geography sampling *国家自然科学基金和北京市重点实验室基金(105802)资助 民族植物学、生物多样性与植物文化 l-2DNA提取及定量 采用CTAB法跚进行，并略作改动，方法如下：将叶片加入液氮研磨成粉状，取适量转 mmol／LTris—HCI，pH 入1．5mL离心管中．力口入500“L65℃预热的2×CTAB提取液(100 8．0，1．4mol／LNaCI，2％CTAB，20mmol／LEDTA，0．4％8一巯基乙醇，0．2％可溶性聚乙 烯吡咯烷酮PVP)，65℃水浴lh；室温冷却至15℃以下，加入等体积的氯仿一异戊醇(24： 000 1)上下混匀，12 rain；取上清加入2／3体积的预冷的异丙醇，轻轻上下颠倒 rpm离心10 000 mL min， 混匀；12 min，去上清；取1 70％乙醇清洗DNA，室温放置5～10 rpm离心10 10 7500 1XTE(内含0．5 rpm离心5 mg／mL的RNAase)； min，弃上清；加入100肛L pL 37℃水浴lh去除RNA；以400 ng／yI。入DNA(华美公司)为参照，1％琼脂糖凝胶电泳检测 DNA的浓度和质量；将样品浓度稀释至5 ng／／A。；--20℃保存备用。 1．3 PCR扩增及产物鉴定 PCR反应在PTC一200Thermocycler dNTP(赛百胜公司)，20 缓冲液，Taq酶1U(赛百胜公司)，10ng模板DNA，200