高效阴离子交换-积分脉冲安培检测法测定巴龙霉素.pdfVIP

第 27卷 第6期 环 境 化 学 Vo1．27，No．6 2008正 l1月 ENVIR0NMENTAL CHEMISTRY November2008 高效阴离子交换一积分脉冲安培检测法测定巴龙霉素 巴龙霉素是一种氨基糖类抗生素，具有抵抗一些革兰氏阳性和革兰氏阴性菌的广谱活性，目前已被广泛用于治疗 人类或者动物的细菌感染，例如人类的利什曼病、似隐胞菌素病和变形虫病．OneWorld健康组织将巴龙霉素定义为用 来治疗罕见疾病的药物．药物在投放市场前检测其中的有效成分是非常重要的．现行的美国药典(USP)方法中使用微 生物法来检测巴龙霉素．但该方法仅能定性，费时且缺乏专一性和准确性．HPLC方法使用 uV或荧光检测也可用来 检测巴龙霉素，但由于其缺少合适的发色基团，为达到足够的灵敏度必须进行衍生． 氨基糖类化合物包含有可氧化基团，因此 ，可以用电化学法检测．和其它方法相比，电化学检测能够选择氧化电 位来检测专一的被分析成分 ，而其它化合物不会被检测，且无需衍生，从而简化了分析的步骤．积分脉冲安培检测和 脉冲安培检测已经成功用于检测氨基糖类化合物，如新霉素和妥布霉素． 本文中提出了一种由电解产生 KOH淋洗液，CarboPacPAl离子交换色谱柱分离 ，使用一次性 AAA金工作电极的 积分脉冲安培检测多种药物配方中巴龙霉素的方法 ，本方法无需柱前或柱后衍生就可准确的检测巴龙霉素，完全符合 现行 USP的技术要求． 1 实验方法 1．1 仪器测定条件 ICS一3000系统包含：DP泵 (带在线脱气单元)；DC检测器模块 (双温控)；电化学检测池，一次性金电极， pH／Ag／AgC1复合参考电极 ；KOH淋洗液发生器单元 (EG)、EG真空脱气配件和CR—ATC；AS自动进样器；Chrome- leon色谱工作站；试剂：巴龙霉素硫酸盐 (USP)，巴龙霉素硫酸盐 (Sigma-Aldrich)，Humatin巴龙霉素硫酸盐胶囊 ； 超纯水，电阻率≥18Mgl·cm 柱：CarboPacPA1分析柱，4×250mm；CarboPacPAl保护柱，4×50mm (P／NO43096)；淋洗液：1．8mmol·J KOH (EG产生)；流速 ：0．50ml·min～；进样体积：20p,1；温度：30~C；检测方式 ：积分脉冲安培 ，AAA—Direct 一 次性金电极，pH／Ag／AgC1参考模式 电位波形 时间／s 电位 (V pH) 数据采集 梯度 积分 时间／s 电位 (V ．pH) 数据采集 梯度 积分 O．oo +0．13 0 On O 0．47 +0．33 On On On 0．04 +0．13 0 On 0 0．56 +O．33 O On Off O．21 +0．33 On On On 0．58 一1．67 0ff On Off O．22 +0．55 On On On 0．59 +O．93 O On 0ff 0．46 +0．55 On On On 0．6O +O．13 Off On 0ff 1．2 标准溶液配制 将干燥后的巴龙霉素硫酸盐USP参考标准物质溶于去离子水中．得到 100mg·ml 的溶液．将 123．1 的100 mg·ml 的储备液加入到20ml瓶中，用去离子水稀释到总体积为2OIlll，可以得到 1mmol·l 的标准中间储备液． 将2ml的1mmol·l 的溶液加到18Inl去离子水中，可将 1mmol·l 的巴龙霉素中间储备液稀释至 100p,mol·l～． 标准中间储备液和标准储备液必须每天配制，且所有溶液不使用时都必须在一40~C下保存．按照准备USP参考标准溶 液的步骤来配制Sigma药物标准溶液，所有溶液都必须当天配制．分别将相应的100wmol·lUSP巴龙霉素、Simga 药物标准和药品成品的标准溶液，用去离子水稀释到 1．25，2．50，3．50，4