鲤春病毒血症病毒糖蛋白在杆状病毒表达系统中的表达与鉴定.pdfVIP

鲤春病毒血症病毒糖蛋白在杆状病毒 表达系统中的表达与鉴定 刘 红 ，郑晓聪 ，于 力 ，王津津 ，贾 鹏 2 fn-I俊强 ，史秀杰 ， 兰文升 ，叶奕优 2 刘 荭 ，吴志新 (1．华中农业大学水产学院，湖北武汉430070； 2．深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心，广东深圳 518001) 摘 要：本实验利用杆状病毒表达系统表达鲤春病毒血症病毒 (sVcv)糖蛋白。将SVCV糖蛋白基因 (G)插 入到供体质粒pFastBacHTA中，再用构建的质粒pFastBac．G转化E coliDH10QBac感受态细胞，经蓝白斑筛 选，获得含 G基 因的重组穿梭载体 Bacmid．G。通过脂质体介导将Bacmid．G转染对数生长期的Sf9细胞，获得 重组杆状病毒 AcNPV-G。AcNPV-G感染Sf9细胞，超声破碎后离心取上清进行 SDS—PAGE及WesternBlot试 验，结果可见大小约为57kDa的蛋白条带，并与羊抗SVCV血清发生特异性反应。间接免疫荧光试验在感染 AcNPV-G的Sf9细胞中观察到荧光信号。试验结果表明，AcNPV-G在sf9细胞 中成功的表达了SVCV糖蛋白， 且具有 良好的免疫学活性。 关键词：鲤春病毒血症病毒；糖蛋白；杆状病毒表达 中图分类号：$941．416；Q786 文献标识码：A 文章编号：1005—944x (2014)06-0074—05 ExpressionandIdentificationofSpringViremiaofCarpVirusGlycoprotein inBaculovirusExpressionSystem LiuHong，ZhengXiaocong，YuLi，WangJinjin，JiaPeng，HeJunqiang，ShiXiujie， LanW ensheng ，LiuHong ，WuZhixin (1．CollegeofFisheries，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan，Hubei430070；2．TheKeyLaboratoryofAquatic AnimalDiseases，ShenzhenExitEntryInspectionandQuarantineBureau，Shenzhen，Guangdong518001) Abstract：Inthisstudy，baculovirusexpressionsystem wasusedtoexpressglycoproteinofspringviremiaofcarpvirus (SVCV)．TheglycoproteingeneofSVCV wasclonedintothepFastBacHTA vector，followedbytransformationinto competentcellsDH10QBacforblue—whiteselection．Thepositiverecombinantbacmid—G wastransfectedtOSf9cell inlogarithmicgrowthphasewithCellfectinReagentinductiontoobtainrecombinantBaculovirusAcNPV-G．A specific 57kDaproteinbandandhybridizingreactionbetweenexpressedproteinandpositiveserum ofSVCVwereobservedby SDSandWestern blot．Forindirectimmunofluorescence，specificfluorescencesignalswereobservedni Sf9cellsinfect· edbyAcNPV-G．TheresultsindicatedthatSVCVglycoproteinhadbeenexpressedinSf9cellswiht immunolog