miR-34在小鼠心脏组织中的表达和功能研究.pdfVIP

· 1264 · 西部 医学 2014年 1O月 第 26卷第 lO期 MedJWestChina，October2014，Vo1．26，No．10 miR-34在小 鼠心脏组织中的表达和功能研究* 陈锡峰 ，陈 飞 ，肖 波 。，黄 安庆 ， (1．苏州大学基础医学 与生物科学学 院，江苏 苏州 215123；2．盐城工学院环境科 学与工程学 院，江苏 盐城 224051) 【摘要】 目的 探讨 miR一34家族 中miR一34a、miR一34b、miR一34c在心脏组织 的表达情况 ，确定这个家族 中哪一个 microRNA是主要表达形式；并比较 miR一34家族在年轻小鼠心脏和老年小鼠心脏 的表达差异 ，检测其 中哪一个成员对 由衰老 引起的心脏功 能退化 具有敏 感性，可作 为心脏功能 的检测 标志 。方 法 提取 小鼠心脏 总 RNA，对 miRNA采 用 加尾 法，反转成 cDNA。使 用 RT—PCR 的方式检测 miR一34a、miR一34b、miR 34c引物 的特异性 。随后使 用 实时荧光 定量 PCR的方法检测 miR一34a、miR一34b、miR一34c三个基 因在心脏细胞 中的表达差异。同时比较年轻小 鼠和老年小鼠心脏 组织 中的miR一34a、miR一34b、miR34c表达量。结果 提取 的总 RNA 经检测符合要求，反转成 cDNA后分别用 miR一 34a、miR一34b、miR一34c的荧光定量 PCR 引物检测 ，确认 引物特异性极好 ，只有单一条带，可以进行下游荧光定量实验 。 在小鼠心脏组织中miR一34a的表达量较 miR一34b和 miR34c高，说 明miR～34a在 miR34家族 中起主导作用。在老年小 鼠心脏 中miR一34a的表达量高于年轻小鼠(2．5倍)。miR一34b在老年小鼠心脏 中也有部分上调 (1．4倍)，而 miR一34c在 年轻小鼠和老年小鼠心脏 中无明显变化。结论 在 miR-34家族 中，miR一34a的表达起主导地位 ，表达量高于 miR一34b、 miR一34c。随着年龄增加 ，miR一34a、miR一34b在老年小鼠心脏的表达量 比年轻小鼠心脏要高，其 中miR一34a2．5倍 的增幅 明显大于miR一34b1．4倍 的增 幅。故可将 miR一34a作 为心脏 由衰老引起 的功能退化 的标 志基 因，也可作诊 断心脏功 能 的重要指标 。 【关键词】 miR一34；心脏 ；衰老 【中图分类号】 R393 【文献标志码】 A doi：10．3969／j．issn．1672—35l1．2014．10．002 FunctionandexpressionpatternofmiR一34 inmiceheart CHEN Xi-~ng ，CHEN Fei，XIAO Bo’一 。etal (1．SchoolofPreclinicalMedicineandBiologicalSciences，Soochow University，Suzhou215123，Jiangsu，China； 2．YamhengInstituteofTechnology，SchoolofEnvironmentalScienceandEngineering，Yancheng 224051，Jiangsu，China) [Abstract] Objective ToinvestigatetheexpressionlevelofmiR——34familyinhearttoconfirm whichoneisdomi—- nantandcomparemiR一34inyoungandoldmicehearttodetectwhichmemberissensitivetoheartaging．Methods The totalRNA andaddthepolyA tailtomaturemiRNA wereextracted．ThemiRNA wasreversetranscribedintocDNA and detectedthespecifi