茭白黑粉菌和茭白植株中DNA的提取方法.pdfVIP

长据置鬈(学术版) 2010(14)：32—35 JOURNALOFCHANGJIANGVEGETABLES 一32一 DOI：IO．3865／j．issn．1001—3547．2010．14．010 茭白黑粉菌及茭白植株中DNA的提取方法 徐蝉，张敬泽，刘娜，徐晓峰，黄建中，郭得平 (浙江大学农业与生物技术学院，浙江杭州，310058) 摘要：研究了茭白黑粉茵及茭白植株中基因组DNA的高效提取方法。采用改进的CTAB(十六烷基三甲基溴化铵) 法提取DNA，根据琼脂糖凝胶电泳检测、A卸，A抛的测定和PCR扩增结果表明，用改进的CTAB法提取茭白黑粉茵及 茭白植株基因组DNA，所得DNA无论是纯度还是完整性都比较好，适合于酶切和PCR扩增，可以用于分子生物学 研究。 关键词：茭白：茭白黑粉茵；DNA；CTAB法 esculenta 茭白黑粉菌(UstilagoP．Henn．)属黑研究的基础和关键。不断有新的DNA提取方法报 粉菌目、黑粉菌科．广泛分布于中国、越南、日本等 道．但不同提取方法的效果有差异川。吴发红等嘲比 latifolia 较了几种真菌DNA提取方法，认为改良的CTAB 东南亚地区。在茭白(ZizaniaTurcz．)生长期 间．正常茭白植株中均存在茭白黑粉菌菌丝，茭白 法效果最好．并且改良CTAB法也常用于植物DNA 黑粉菌与茭白植株共生，并在茭白植株体内分泌代 的提取tg-n】。本试验参考多位前人提取基因组DNA 谢产物刺激茭白花茎基部膨大形成肉质茎【1】，从而 的方法叫71．采用改进的CTAB法对茭白黑粉菌及茭 形成经济产量。目前对茭白黑粉菌及茭白植株分子 白植株的基因组DNA进行提取，以期为下一步分 生物学方面的研究鲜有报道，而要进一步深人研究 子生物学研究试验作准备。 其分子生物学特性并得到良好的试验结果，就必须 1材料与方法 获得适合于内切酶酶切和PCR扩增的高质量的 1．1材料准备 DNAt刁。 茭自黑粉菌成熟冬孢子于2009年秋采自浙江 随着分子生物学技术的不断发展。基于PCR 省湖州市德清县，于PDA培养基上培养纯化，得到 技术的分子生物学方法，如直接测序、RAPD分析 菌落1181。从PDA培养基上刮下菌落，用无菌去离子 和AFLP分析研究亲缘关系遗传多样性水平，这些 000 水洗涤3次，每次均经5 r／min离心后倾去上清 都要求一种安全快捷、成本合理且有效的DNA提 液。然后将洗涤后的菌落置于45℃恒温箱中过夜， 取方法13,41。但由于不同材料的细胞中所含次生代谢 菌落干燥后即可用于基因组DNA的提取。 产物的种类和含量不同，所以不同材料的DNA提 茭白植株取自浙江大学试验农场，田间选取新 取方法也不尽相同。如提取成年树木的基因组 鲜幼嫩组织直接带回实验室立即用于基因组DNA DNA时不使用液氮151：Danilevich等fq用盐缓冲溶液 高温沸煮的方法直接提取用于PCR多态性扩增的 的提取。 1．2主要仪器