天蓝苜蓿锌胁迫下实时定量PCR内参基因筛选.pdfVIP

中国环境科学 2015，35(3)：833-838 China EnvironmentlScience 天蓝苜蓿锌胁迫下实时定量PCR内参基因筛选 张德辉，孙亚丽，赵 亮，丑敏霞’(西北农林科技大学生命科学学院，旱区作物逆境生物学国家重点实验室，陕西 杨凌 712100) … 摘要：选取 8个管家基因(地口，act、18s、tub、ubi、 、cyp、g印 )作为候选内参基因，以不同浓度 Zn 处理下接菌第 3(d的天蓝苜蓿 (MedicagoLupulinaL．1接种根为实验材料，筛选用于 目的基因实时荧光定量PCR分析的最佳内参基因．研究表明：候选内参基因平均表达稳 定性由高到低排序为：，1 18sutb；在不同Zn2浓度胁迫下，最适 内参基因组合各不相同：zn+_10omg，kg时，最佳 内 参基因组合为 tub(1．97)~tleft (2．O6)；Zn~+=2OOmg／kg时，最佳 内参基因组合为 ，l(1．41)和 ubi(2．5D；Zn~~=30Omg／kg时，最佳 内参基因组合 为 (1．41)~11h2a(2．78)；zIl2=400mglkg时，最佳内参基因组合为 (2．45)~1act(2．55)．该研究可为重金属污染地天蓝苜蓿沆性基因和共 生基因的表达分析提供理论依据． 关键词：天蓝苜蓿；接种根；内参基因；实时荧光定量PCR；锌 中圉分类号：x53 文献标识码：A 文章编号：l000—6923(2叭5)03—0833—06 Reofrencegeneselection forquantitativereal-timePCR normalization inMedieagoLupulinaunderzincstress． ZHANG De-hui，SUNYa-li，ZHAO—Liang，CHOU—Min-xia‘(CollegeofLifeSciences，StateKeyLaborataryofCrop StressBiology inAridAreas，NorthwestAgricultureandForestry University,Ynagling712100，China)．China EnvironmentalScience，2015，35(3)：833～838 Abstract：Expressionstabiliytofcandidatereferencegenes(h2a、act、18s、tub、ubi、 、eyp、gapdh)Ⅵastestedfor qRT-PCR during growthconditionsunderthedifferentzinc stress．TherootsofMedicago lupulina inoculatedwith rhizobiawereharvestedin30daysasplnatmaterials．Ourresultsshowedthathteaverageexpressionstabiliytoftheeight cnadidatereferencegenesfromhightolowwaseflubtacth2agapdhcyp18stubover~1．Specifically,tub(1．97) nad (2．06)werebeRerreferencegenesunderhtelowZn concenrtation(100mg／kg)；Thegenes (141)nadubi (2．51)werehtebestgenesunderZn concenrtation(200mg／kg)；UnderZn2+concenrtation(300mg／kg)， 【(1．41)and h2a(2．7s)werehtemostcomparativelysuitablegenes；while 1(2．45)andact(2．55)wereconsideredashtemost reliablereferencegenesunder恤ehi曲 zn concentration(400mg／kg)．Inconclusion，Allresultsprovidethjhteoretical foundationofrgeneexpressionstudyinMedicagolupulinaunderhtedifferentZn concenrtation。