家蚕肠道细菌菌落形态与产消化酶相关性研究.pdfVIP

第 39卷 第 12期 西 南 师 范 大 学 学 报 (自然科学版) 2014年 12月 Vo1．39 No．12 JournalofSouthwestChinaNormalUniversity(NaturalScienceEdition) Dec． 2014 家蚕肠道细菌菌落形态与产消化酶相关性研究① 李冠楠 ， 夏雪娟。， 赵欢欢 ， 隆耀航 ， 唐文超 ， 辛 佳 ， 李汉歌 ， 朱 勇 1．西南大学 生物技术学院，重庆 400716；2．西南大学 食 品科学学院，重庆 400716 摘要 ： 【目的】研究肠道细菌的菌落形态与其产酶的相互关系，有助于产酶菌的筛选和家蚕饲用微生态制剂 的开发 应用．【方法】从家蚕肠道 内共分离 出细菌 28株 ，挑选菌落形态有 明显差异的细菌 7株用于产酶菌研究．用筛选培 养基鉴别各菌株 的产酶情况 ，并结合 16SrDNA序列测定和系统发育分析法鉴定其种属 ．根据菌落形态和产酶特 性，推测细菌的表型基 因与产酶基 因表达之间存在某种相互联系． 【结果】鉴定出产酶的细菌为芽孢杆菌、葡萄球 菌 、不动杆菌 ，这些细菌在菌落形态上有一定 的相似性 ，菌落均为乳 白色、生长速度快、表面粗糙 、边缘不整齐． 【结论】细菌菌落形态差异性可作为产酶菌筛选 的参考依据 ，减少实验工作量和节省时间等．为筛选益生菌和饲用 微生态制剂 的研 ：芟提供理论基础． 关 键 词 ：肠道 ；菌落形态 ；产酶 菌 ；鉴定 ；微生 态制 剂 中图分类号 ：S8ll1．2 文献标志码 ：A 文章编号 ：1000—5471(2O14)12—0053—05 昆虫肠道 内寄生着多种细菌，正常的肠道细菌对宿主具有营养 、代谢 、生物拮抗等作用口]．家蚕 既是 特种经济动物 ，又是鳞翅 目类昆虫研究的模式生物，因此其肠道中的产酶菌研究对开发微生态制剂具有重 要意义．随着分子技术的发展 ，目前 已有多种方法检测肠道的微生物多态性 ，如变性梯度凝胶 电泳技术 (DenaturingGradientGelE1ectr0phoresis，DGGE)和高通量测序等口 ]，但直接能筛选出产酶菌 的分子技 术还没有相关报道．利用传统方法筛选产酶菌仍然是主要的筛选方法 ，该方法是利用相应 的筛选培养基对 划线分离出的菌株进行筛选，此法不仅工作量大而且还耗费时间． 细菌菌落的形态学研究在很早以前就已经开始而且应用面很广 ，如吴海波等L4研究 4种甜瓜蔓枯病细 菌菌落形态与致病力比较 ；王 国戗等 研究鲍曼不动杆菌的菌落形态与药敏之间的相关性 ；赵智颖等 研 究粘细菌的菌落形态为粘细菌的分类鉴定奠定基础；廖忠等 ]研究铜绿假单胞菌的菌落形态 的临床分布与 耐药性 的相关性 ；李夏兰等_8]通过对菌落形态特征和 rDNA ITS1—5．8S—ITS2系统发育分析鉴定细菌种 属．综上所述 ，细菌的菌落形态与其 自身的某些特性存在一定 的联系．本研究从细菌菌落形态差异性出发 ， 对产酶菌进行分子鉴定和分析 ，找出其 中的相互关系．为研究产酶菌的筛选提供理论依据 ，并且为开发微 生态制剂奠定基础． 1 材料与方法 1．1 材 料 1．1．1 菌 株 所用菌株 由西南大学生物技术学院家蚕遗传育种室提供． ① 收稿 日期 ：2O13—1Z一01 基金项 目：国家农业科技成果转化资金 (2012GB2F100376)． 作者简介 ：李冠楠(1985一)，男 ，吉林四平人 ，博士研究生 ，主要从事家蚕遗产育种的研究 通信作者 ：朱 勇 ，教授 ，博士研 究生导师． 54 西南师范大学学报 (自然科学版) http：／／xbbjb．SWH．cn 第 39卷 1．1．2 培养基和培养条件 基础培养基 (NA)：蛋白胨 10．0g，牛 肉膏 5．0g，NaC15．0g，琼脂 18．0g，去离子水 1000mI，调 pH为 9．2～9．8，121℃高压灭菌 20min后备用．液体基础培养基 (NB)中不加琼脂 ，其余相同．筛选培养 基 ：分为蛋 白、纤维素、脂肪 、淀粉等 4种培养基，具体配制详见高绘菊等 方法．所有菌株在 37℃条件 下培养 48h后观察菌落形态和产酶情况_】． 1．1．3 引 物 细菌通用引物 27