改性氯甲基壳聚糖Ce（Ⅲ）树脂对牛血清蛋白水解作用的研究.pdfVIP

堕塑篁!堕 里茎童鐾 !! 堕 生 堡自 壁 窒 文章编号 ：1001—9731(2014)17-17045—05 改性氯 甲基壳聚糖 Ce(Ⅲ)树脂对牛血清蛋白水解作用的研究 刘晓妮 ，齐宏涛，刘子汇，刘炳杰，汪东风 (中国海洋大学 食品科学与工程学院食品化学与营养实验室，山东 青岛266003) 摘 要 ： 以负载 1，4，7，10一四氮杂环十二烷 (eyclen) 化学改性修饰 ，制成高分子材料口 。以壳聚糖树脂作 的氯 甲基 壳聚糖树脂 (merrifieldchitosanresin—sup— 为金属酶的碳骨架，不仅能够提供反应所需的微环境， portedcyclen，MCRC)为载体 ，配合 Ce(111)，得 到 以 易于回收利用 ，降低成本 ，又能够保证食品 口感及安全 Ce(Ⅲ)为催化 中心的改性氯 甲基壳聚糖 Ce(III)树脂 性 。 (MCRC—Ce(Ⅲ))。通过 茚三酮 比色法 、SDS—PAGE 电 本文以壳聚糖树脂作为碳骨架 ，通过用 Cyclen分 泳法及氨基酸 自动分析仪等技术，检测 MCRC—Ce(111) 别与 Mg(1I)、Cu(II)、Zn(II)、Fe(11)、Fe(IlI)、Ce 对牛血清蛋白(BSA)的水解能力。结果表明，MCRC— (IlI)、Ce(1V)配合 ，得到多种改性壳聚糖金属离子配合 Ce(1]I)在生理 pH值 ，6O℃条件下，可将 BSA水解为 物树脂 。以BSA作为 目标蛋 白，采用茚三酮 比色法、 短肽和氨基酸 ，24h后水解率可达 88 ，水解速率表 SDS—PAGE电泳法和氨基酸分析法 ，系统研究其对肽 观常数 Kob为 7．O5×10 mo1．L ·h_。，重复使用 6 键的水解作用 ，以期为制备出高效安全 的蛋 白质模拟 次后 ，仍能保持 80 以上的水解能力，具有广 阔的应 酶提供基础性资料 。 用前景。 2 实 验 关键词 ： Ce(Ⅲ)；壳聚糖树脂 ；牛血清蛋 白；催化水 解 ；模拟酶 2．1 主要原料 中图分类号 ： TQ323．5；TQ133．3 文献标识码 ：A 壳聚糖 (脱乙酰度 91 ，分子量 5．6×10Da)购于 DOI：10．3969／i．issn．1001—9731．2014．17．O9 青岛海汇生物技术有 限公司；1，4，7，10-四氮杂环十二 烷 (cyclen)，购于上海凯塞化工有限公司；牛血清蛋 白 l 引 言 (BSA)，购于北京索莱宝科技有限公司；SDS所 蛋白质水解技术在食品工业中占有极其重要 的地 用试剂购于宝生物工程有限公司；其它试剂均为国产 位 ]，传统方法主要为化学水解和蛋 白酶水解 ，其过程 AR级 。 中容易生产 I)_氨基酸、氯丙醇等有毒有害物质，且成 2．2 MCRC金属离子配合物树脂的制备 本较高，受外界 因素影响较大 ，回收困难等 ]。近年 参考文献[16]，以环氧氯丙烷为交联剂 ，采用反相 来 ，模拟酶成为仿生学研究热点之一 。研究发现 ，许多 交联悬浮法制备氯 甲基壳聚糖树脂 (MCR)。以N， 天然酶如尿素酶口]、基质金属蛋 白酶 (MMP)_4]、核酸 Nf_二 甲基 甲酰胺 (DMF)为溶剂 ，用 cyclen对其进行 酶 等的活性中心都含有金属离子 ，它们在与底物结 改性 ，得到改性氯 甲基壳聚糖树脂 (MCRC)。分别 合和催化底物水解过程 中起到 了极为重要 的作用 。基 在 Mg(AC)2、CuC12、Zn(AC)2、FeSO4、Fe2(SO4)2、Ce 于MMP的水解机理 以及金属离子配合物对蛋 白质的 (NO )、Ce(NH )：(NO )。的 乙醇溶 液 中加 入 水解更温和的特点_6]，金属配合物作为金属酶模拟物