HPLC―荧光法测定大鼠血浆中4种蒽醌类成分及其药代动力学研究.docVIP

HPLC―荧光法测定大鼠血浆中4种蒽醌类成分及其药代动力学研究 　　[摘要]建立大鼠灌服栀子大黄汤后血浆中芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚的测定方法并考察4种蒽醌类成分在大鼠体内的药动学行为。采用HPLC-荧光法测定大鼠血浆中4种蒽醌的血药浓度，血浆样品通过液液萃取法进行处理。Phecda C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相0.2%乙酸-甲醇，梯度洗脱，流速1.0 mL?min-1。激发和发射波长分别为430，525 nm，采用DAS 2.0软件对所得的血药浓度进行拟合，求算相应的药动学参数。结果显示4种蒽醌类成分均可被吸收进入体内。大鼠血浆中芦荟大黄素，大黄酸，大黄酚，大黄素甲醚的Cmax分别为（0.085±0.058），（3.772±1.152），（0.464±0.267），（0.028±0.008） mg?L-1；tmax分别为（1.042±0.510），（0.805±0.307），（1.167±0.283），（0.616±0.162） h；t1/2分别为（3.557±1.250），（6.879±1.126），（5.196±2.032），（4.337±1.816） h；AUC0-t分别为（0.504±0.130），（9.558±1.106），（2.545±1.554），（0.052±0.018） mg?h?L-1。该研究建立了一种专属性强，准确度高，灵敏度好的HPLC-荧光法，可适用于4种蒽醌成分的体内浓度测定。 　　[关键词]栀子大黄汤；蒽醌；HPLC-荧光法；药代动力学 　　栀子大黄汤最早记载于《金匮要略》，临床上用于治疗冠心病[1]，急性胰腺炎[2]，黄疸[3]。该方剂由栀子、大黄、枳实和淡豆豉4味药材组成。本课题组前期研究了该方剂的物质基础，及配伍变化对栀子中京尼平苷药动学的影响，定量测定了该方剂中9个特征性成分[4-6]。目前关于栀子大黄汤中蒽醌类成分的药动学研究未见报道。中药体系复杂，其药效可能是多种物质综合产生的结果。对中药的有效成分进行药代动力学研究，可以为中药发挥药效提供一定的科学解释[7-8]。蒽醌类成分因其具有广泛的药理活性被认为是大黄的有效成分[9]，主要包括芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚。本研究采用HPLC-荧光法测定大鼠血浆中芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚的浓度，首次阐明了大鼠灌服栀子大黄汤后血浆中4种蒽醌类成分的药动学特性，为进一步开展该复方的研究奠定基础。 　　1 材料 　　1.1 药品与试剂 栀子（批产地江西），大黄（批号130322，产地甘肃），枳实（批号130318，产地江西），淡豆豉（批号130218，产地河南），均购于南京先声药店。经中国药科大学中药学院秦民坚教授鉴定，栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥果实；大黄为蓼科植物药用大黄Rheum officinale Baill的干燥根和根茎；枳实为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果；淡豆豉为豆科植物大豆Glycinemax （L.）Merr.的成熟种子的发酵加工品。芦荟大黄素（批，大黄酸（批，大黄酚（批，大黄素甲醚（批，均购于成都曼思特生物科技有限公司，纯度均大于98%。内标1，8-二羟基蒽醌（批号110829）购于中国食品药品检定研究院。甲醇（色谱纯，江苏汉邦科技有限公司）；乙酸（分析纯，南京化学试剂有限公司）；水为娃哈哈纯净水，其他试剂为分析纯。 　　1.2 仪器 LC-10ATvp高效液相色谱仪（日本岛津公司），AnkeTGL-16B高速离心机（上海安亭科学仪器厂），AB135-S电子天平（梅特勒-托利多），AEU-210电子天平（日本岛津公司），XW-80A旋涡混合器（上海医科大学仪器厂），高速多功能粉碎机（上海冰都电器有限公司），RE-52CS型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。 　　1.3 动物 清洁级SD大鼠，雄性，体重（250±10） g，由南京青龙山动物中心提供，动物许可证号SCXK （浙） 2008-0033。饲养温度为20～25 ℃，饲养环境湿度为（45±10）%。 　　2 方法 　　2.1 栀子大黄汤（ZZDHD）的制备 取栀子9 g，大黄3 g，枳实12 g，淡豆豉24 g，粉碎，加10倍量水浸泡30 min，武火煮沸后，文火煎煮30 min，4层纱布过滤；滤渣重复提取2次，合并3次滤液。滤液经旋转蒸发浓缩后制成ZZDHD冻干粉。栀子大黄汤中4种蒽醌的含量测定参考文献[6]。 　　2.2 灌胃及采血 称取ZZDHD冻干粉适量，用0.5%羧甲基纤维素钠配制成栀子大黄汤，生药