病理特殊染色组织化学技术应用.pdfVIP

201 1年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 HE染色结果显示，经乙醚酒精固定的切片，镜下见组织结构清楚，背景干净，细胞核 呈紫蓝色，核内容物清晰可见，细胞质色彩鲜艳，核质对比清晰，与石蜡切片效果相似。经 95％酒精固定的冰冻切片，染色效果仅次于乙醚酒精，镜下见组织结构尚清晰，细胞核染色 稍欠佳，核染色质不清晰，细胞质着色比乙醚酒精稍淡。 3讨论 术中快速病理诊断中的组织冷冻切片和HE染色需要尽快完成，冰冻切片固定也要比常 规操作缩短时间，这样要求选用的固定液既能快速固定切片，又要有良好的固定效果。因此 冰冻切片固定液的选择是冰冻切片染色的关键步骤，固定的作用在于使蛋白变性、凝固、沉 淀，保持细胞、组织原有的形态结构。用于组织固定液有多种，甲醛是常用的组织固定液， 但10％甲醛溶液固定冰冻切片固定时间长，需要10分钟以上，如果仅固定5秒钟，则切片固 定不佳，组织染色无论是组织结构清晰度还是细胞核细胞质的对比染色效果都达不到要求。 丙酮固定的冰冻切片染色尚好，组织结构可见，但细胞核模糊，皱缩明显，对比度欠佳，着色 不均匀，而且组织收缩剧烈，容易掉片，不是理想的选择。甲醇固定液在冰冻切片中细胞形 态的固定作用得到肯定，细胞形态良好，但固定时间比乙醚酒精时间要长，且气味较大，且 有毒性，对操作人员健康造成危害。乙醚酒精固定作用较快，固定切片仅3．5秒钟即可，组织 细胞收缩小，组织结构较清晰，胞核胞质对比染色佳。95％酒精能除去切片上的水份，保存 完整的组织结构，但它使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解，另外对胞核染色稍欠佳，所 以95％酒精作为单纯的固定液不理想。用AF固定液固定组织清晰度一般，核染色较模糊， 细胞膨胀，除了固定时间稍短外与10％甲醛固定效果相似。实验结构表明，乙醚酒精是固定 作用好，固定时间短，配制简单，操作方便，是一种最为理想的冷冻切片固定液，值得推广 应用。 4参考文献 [1】孙和国，何毅敏等．三种固定液对冷冻组织切片固定效果的比较【J】．诊断病理学杂志，2001， 8(2)：114 【2】万丽．五种冷冻固定液的比较[J】．温州医学院学报，2005，VOL．35No．6；512 【3】吴艳霞．冰冻切片的制作方法分析．吉林医学，2009，30(3)：493 114．病理特殊染色与组织化学技术及其应用 中山大学附属第一医院病理科中山医学院病理教研室 粱英杰 特殊染色与组织化学技术是临床病理诊断中重要的辅助技术之一，特殊染色与组织化学 技术的应用，对提高临床病理诊断水平有很大的实用意义。很多特殊染色和组化染色至今一 直应用在临床病理诊断中，其作用不能用免疫组化技术所代替。 一、概念 1．特殊染色：组织细胞内很多成分在HE染色中不能显示出来，需要用不同于苏木精． 220 2011年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 曙红的特殊染料进行染色，以便将所需要观察的物质显示出来。对这些染色常称为“特殊染 色”，和常规HE染色以示区别。如VG染色，刚果红染色和Giemsa等。 2．组织化学染色：组织细胞内很多成分在HE染色中不能显示出来，需要用不同于苏 木精．曙红的特殊试剂，在组织切片或细胞涂片上利用生物化学反应来显示组织或细胞所含 某些物质的成份、分布和含量，以了解这些物质在组织和细胞中的变化和意义。对这些染色 常称为“组织化学染色”。如含铁血黄素染色，ATP酶染色等。 酶组织化学染色是把组织学、细胞学和生物化学结合起来的一门染色技术，将形态和功 能结合起来研究组织细胞的生理和病理改变及其机制。 二、特点 特殊染色和组织化学技术是在形态学的基础上，能够定性、定量和定位地检测出组织细 胞中的某些特殊物质，而一般的生化测定只能定性和定量却不能定位。如研究细胞内的核酸， 应用组织化学技术方法，既可以检测出组织细胞中核酸阳性或阴性及其阳性的强弱即含量的 多少，同时可以观察到DNA主要分布在细胞核内，而RNA主要分布在细胞浆，少部分分布 在核仁。在酶组化染色中，不仅可以检出酶的性质，也可以测定酶的含量(阳性反应强弱不 同，酶的含量也就不同)，还可以确定不同的酶所定位的不同