常规病理诊断中应用原位杂交和免疫组化方法检测EB病毒的体会.pdfVIP

201 1年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 胰岛素瘤为胰岛B细胞肿瘤，亦称内源性高胰岛素血症，属于胰腺内分泌肿瘤(pancreatic endocrinetumor，PETs)， 胰腺内分泌肿瘤起源于胰腺内分泌细胞，是临床上比较少见的一 群肿瘤，分为功能性和无功能性两类。胰腺功能性内分泌肿瘤与特定的激素分泌有关，具有 特异的临床症状。无功能胰腺内分泌肿瘤则不具有特异的生物学功能，不引起特异的内分泌 功能紊乱的临床症状。胰腺无功能性胰内分泌肿瘤较少，约占15．30％。这类肿瘤并非真的 无功能，它们也可分泌一些物质，如嗜铬素A(CgA)、神经烯醇化酶(NSE)、胰多肽等， 但由于分泌的这些物质无活性，导致临床上没有明显的内分泌综合征。胰腺功能性内分泌肿 瘤与特定的激素分泌有关，具有特异的临床症状。功能性PETs共有十种Ⅲ，包括1955年 (vasoactiveintestinal peptide，VIP)瘤等。 在胰腺功能性内分泌肿瘤中，胰岛素瘤最常见。胰岛素瘤原名胰岛D细胞瘤，是起源 于胰岛p细胞的肿瘤，是内源性高胰岛素血症引起低血糖最常见的原因之一，是一种临床较 为少见的肿瘤，患病率约为8-9／10万131。胰岛素瘤分泌过多的胰岛素从而引起低血糖症状， 可以出现精神异常、癫痫、甚至昏迷等严重的神经系统症状，影响患者的生存。目前关于胰 岛素瘤发病机制尚不明确，国内外文献也报道较少。近年研究显示细胞周期调节因子与胰腺 内分泌肿瘤发病机制有关。虽然分子生物学等方面进展研究较快，但其确切的发病机理仍不 十分清楚。胰岛素(Insulin)是胰岛p细胞分泌的一种激素，可以减低血糖浓度，此抗体可 以和人胰岛素反应。免疫组织化学染色法是组织特殊染色的一种具有特异性高和灵敏度强的 技术方法，本研究就采用免疫组织化学染色的方法，发现Insulin在胰岛素瘤中高表达，从 而为胰岛素瘤的鉴别诊断及探索胰岛素瘤的新的定位检查和治疗方法提供了有价值的资料。 62．常规病理诊断中应用原位杂交和免疫组化方法检测EB病毒的体会 王颖，陈定宝，沈丹华 北京大学人民医院病理科，100044 的病毒株而异，平均175kd，被衣壳蛋白包裹，核衣壳外有包膜，主要成分是糖蛋白【l】。许 多肿瘤和非肿瘤性疾病与EBV感染有关，鼻咽癌，鼻型NK／T细胞淋巴瘤，Burkitt淋巴瘤， 霍奇金淋巴瘤，传染性单核细胞增多症等。其检测方法有免疫组化、原位杂交和电镜等。我 们结合实际工作，对原位杂交和免疫组化方法检测EB病毒的效果进行了比较。 l材料与方法 1．1材料 病例标本来自北京大学人民医院病理科。标本经10％中性甲醛固定，常规石蜡包埋， 连续切片(3-4“m)，分别进行免疫组化及原位杂交。免疫组化及原位杂交试剂盒购自北京 中杉金桥生物公司。 1．2方法 白产物LMPl。 织抗原经高压热修复；切片加3％过氧化氢室温下孵育10rain，PBS冲洗3minx31加一抗， 122 201 1年全国病理技术新进展研讨会论文汇编 育30min：PBS冲洗3minx3；DAB显色；苏木素复染。 原位杂交：(1)切片处理：4um切片，用处理过的切片捞片；65℃烤片2h．二甲苯脱 HCL 蜡2x10min；脱蜡后新鲜100％乙醇放置5min，空气中彻底干燥。(2)酶处理：稀释1N 胃酶稀释液；用稀释后的HCL溶解分装胃酶，每张切片加入300-4009l稀释好的胃酶工作 液37℃30min；弃去胃酶工作液；逐级酒精脱水(每个梯度lmin)、空气干燥后杂交。(3) 杂交：20ul探针／切片，加盖玻片；杂交37℃16h；切片插入PBST缓冲液中以便去掉盖玻 2．结果16例病例原位杂交技术检测，EBER阳性7例(7／16，43．8％)，阳性信号定位于细 胞核，呈棕色(图1)，染色较浓，易于辨认；免疫组化染色检测LMPI阳性4例(4／16，25％)， 阳性信号定位于胞浆(图2)，16例中EBER和LM