牧草DNA基因多态性研究在草业中应用.pdfVIP

牧草DNA基因多态性研究与在草业中的应用 张新跃 (四川省草原工作总站，四川成都610041) 摘要：系统介绍了分子生物学研究DNA基因多态性原理、方法，对基因多态性分析技术在草业 科学中的研究内容，研究方向和今后的应用问题提出了看法和建议． 关键词：基因多态性；草业中的应用；DNA 1分子生物学与DNA基因的多态性 1．1分子生物学与基因工程 分子生物学是在分子水平上研究生命结构与功能的学科，主要研究细胞各系统之间相互作用，包括 DNA，RNA和蛋白质合成之间的相互作用以及这些作用是如何被调节的。分子生物学基本技术指重组 DNA技术，也称为基因工程技术、基因操作和遗传工程。基因工程的本质是按照人们的设计蓝图，将 生物体控制性状的基因进行优化重组，并使其稳定地遗传表达。这一技术在超越生物王国种属界限的同 时，简化了生物物种进行程序，大大加快了生物物种的进化速度。 1．2 DNA基因的多态性 1．2．1基因的特点 1866年Gregor 创造了“gene”一词以后，逐渐形成基因的概念。基因是一段可以编码，具有某种生物学功能的核苷酸 序列。基因具有以下特点：①不同基因具有相同的物质基础：②基因是可以切割的；③基因是可以转移 的：④多肽与基因之间存在对应关系；⑤基因密码是通用的；⑥基因可以通过复制把遗传信息传递给下 一代。 1．2．2基因的多态性 生物有机体，尤其是具有复杂结构的真核生物，其DNA含量是十分庞大的。基因的基本结构是由 四种核苷酸(A．T．QC)构成的不同核苷酸序列。由于核苷酸序列和基因片段长短不同，真核生物染色 体由数以百万计的基因构成，在表达中由于受DNA、蛋白质和酶的相互作用，更使基因的表达十分庞 大和繁杂。在生物界受进化过程、遗传、变异、繁殖、环境和人为作用等影响，基因的多态性也无时不 再，所以呈现出丰富多彩的生物界。基因的多态性有以下特点：①生物界丰富多彩的变化既是基因多态 10 性的表现，也反映了多态性的程度。②分类系统在很大程度上表现了基因多态性差异。③种间繁殖隔离 是造成生物界在进化过程中产生基因多态性的基础和条件。④种内多态性差异受繁殖环境隔离、环境条 件和遗传变异等影响，多表现为个体差异，这种差异程度和数量，由于受基冈交换作用，表现出有限性。 ⑤环境的自然选择既丰富了物种，也对基因多态性产生归类作用，是基因多态性和一致性这一基本矛盾 的对立统一。⑥人类对生物的选择(选育)是利用多态性变化，选择一致性内容，以达到为我所用的目 标。 2 DNA基因多态性分析 2．1基因鉴定 基因理论创立后，人们一直都在不断探索基因与表达的关系，并试图按照人类的需要将某种基因从 一种生物重新组装到另一种生物上，创造出新的生物，这就诞生了“基因工程”或称“遗传工程”。人 类要想改变世界，必先了解世界。基因的状态如何?这就为我们提出了基因多态性分析的基本要求。随 着基因工程的发展和品种鉴定的需要，目的基因和品种的遗传基础，都需要通过基冈的分析来确定，基 cllain 因的多态性分析应运而生。在基因工程研究中，聚合酶链反应(Polymeras 克隆(molecular elolving)，DNA测序(DNAsegueneing)一起构成了三大主流技术。在基因工程研究 中，从基冈的多态性分析到重组子的鉴定分析，转移后的目标基冈是不在阳性克隆中出现，从基因测序， 再到人类基因组草图的完成，经历了几十年，很多基因鉴定方法被发明。遗传基因鉴定方法很多，不同 的方法用于不同的目的。在草业科学研究中，目前还没有转基因牧草新品种提交审定，研究内容多数是 围绕育种材料和品种鉴定进行。 2．2草业科学中常用的多态性分析方法 2．2．1核酸的凝胶电泳 凝胶电泳的基本原理是在硷性条件下(PH8．0．8．3)，核酸分子带负电荷，在电场中向着与其电荷相 反的电极方向移动。凝胶是支持电泳介质，它具有分子筛效益。移动的速度可冈电离子的大小、形态和 电荷量的不同而有差异。利用不同的凝胶和移动速度的差异，就可以区别各种大小不同的分子。因而， 凝胶电泳可用于分离、鉴定和纯化DNA片段。常用的两种凝胶为琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶。琼脂 不同蛋白质分子量进行电泳分离，它适用于低于相对分子