热处理法在常规HE染色发灰组织切片中应用.pdfVIP

2009年全国病理学技术进展和应用研讨会 热处理法在常规HE染色发灰组织切片中的应用 007 田玉旺李琳朱红艳苗金红邢宜(北京军区总医院病理科1 00) 在常规HE染色过程中，经常发现同定前已干洞的组织、过度同定、脱钙及烤片过长的组织易造 成切片着色困难，细胞核着色淡、小着色或一片灰染。此时若组织较少或已用完，无法重新再取材，势 必给临床病理诊断带来严重影响。经大晕实验，我们对原组织切片在染色前进行热处理，使染色质最得 到了明显改善。 1、材料与方法 1．1材料HE染色切片发灰的组织蜡块经重新切片后采用热处理法，如干涸的宫颈组织蜡块切片3张， 分别进行PBS-微波处理；EDTA-高压锅处理：未处理组作为财照。 1．2方法切片脱蜡全水，分别进行PBS-微波处理(80℃)5rain；EDTA一高压锅处理3min(喷汽后 开始计时)，处理后的切片和未处理组同时常规HE染色。 2、结果 未处理组：宫颈组织切片HE染色局部或片状灰染，染色模糊不清，细胞核结构不清；PBS一微 波处理组，宫颈组织切片HE染色质最有一定改善，但以EDTA-高压锅处理组染色效果较佳，细胞结构清 楚，核染色质量明显改善。 3、讨论 在日常病理制片工作中，造成组织切片发灰的原因我们认为主要与下列因素有关： 组织取材同定小当可致染色不均。如组织取材过大或过厚(2mm)，所用之固定液浓度过大，穿 透力较小时，不能将组织同定透或固定小完全，其组织切片经染色后，出现切片外周固定好的部位，细 胞着色清晰，但中问或未同定好的组织，细胞着色模糊，从而造成染色不均。 、 组织脱水时间过短，造成脱水不彻底。组织中含有水分，进而使透明、浸蜡不彻底。这种处理不彻 底的组织，切片易出现片状灰染现象。 取材因素 在取材时组织标本已经发生腐败自溶或取材后没能及时固定或固定液浓度不够，必然 造成组织结构模糊小清，这是由于组织结构分解变性，使组织变酸，因而切片被染成灰兰色。另外，同 定前已干枯的标本，切片经染色后，在干枯区域内出现成片的灰染现象。 固定因素 组织同定不良是造成切片染色模糊小清的主要原冈。存放标本的同定液浓度彳i宦过高 或过低，有的偏低，有的甚至用纯福尔马林。浓度偏低，在正常固定时间内，蛋白质发生沉淀和凝同必 然小允分，由胶状物质变成不溶性的同体状态也必然不充分，使细胞内成分本应产生的不同折光率、光 学差异刁i够显著，组织生活状态下，原来看小清楚的结构也就不能清晰起来。而且由于浓度低、同定不 足，其媒染效果也差，故易出现切片模糊小清现象。同定液浓度过商，其对蛋F1质的沉淀和凝同作用人 强，使组织表面迅速沉淀凝同变硬，减弱了同定液对组织的渗透能力，造成组织中问部分同定不佳，甚 至达／1i到同定目的。 在送检的标本中，有时临床科用酒精同定组织，常温下，酒精沉淀的F1蛋白、球蛋白不再溶于水， 而被沉淀的核蛋白则可再溶于水。冈此，造成酒精同定的标本，切片核染色不良，胞质染色也较差，切 片出现模糊小清现象。 2009年全国病理学技术进展和应用研讨会 工作中经常发现淋巴组织(淋巴结、鼻咽部组织及扁桃体等)，由于处理小?1’造成切片染色后组 织中问出现发灰现象，其主要原因可能是由于其细胞密集、结构复杂，导致同定液较难渗透到组织深 部，从而造成组织中央同定4i佳，结果染色彳i良，而出现切片发灰现象。 组织(特别是同定不佳的组织)浸蜡、包埋时如果温度过高或切片后烤片温度过高，均会使蛋 白质发生质变，对染料可能发生拒染，造成切片染色模糊彳i清。 脱钙过度(如骨髓活检标本)亦易造成切片染色发灰。过度处理的标本，特别是细针活检标本。 组织用酸性甲醛同定或组织在甲醛中同定时间过久，导致组织切片在染色时易出现着色淡或／1i易着 色，一片发灰。甲醛暴露于口光或与空气接触久置后，甲醛氧化自行分解产生甲酸，而使溶液早．酸 性，对伊红的染色较差，严重时可影响细胞核的着色 我们经大景实验，对上述因素引起HE染色切片发灰的组织蜡块，重新切片后采用“热处理法” 进行处理，使HE染色质量均得到了不同程度的提商，细胞结构清楚，核染色质量明显改善。其作用 原理可能是：组织切片经在重金属溶液中加热处理后能改变甲醛的固定效应(或可逆转其固定效 应)