视网膜血管铺片技术在家兔视网膜血管病变研究中应用.pdfVIP

而部分差异蛋白在睫状体平坦部滤过术组中的表达有所恢复；与正常对照组相比较，高眼压模型组 中上调蛋白有4个，部分差异蛋白在睫状体平坦部滤过术组中的表达呈现恢复的趋势。结论：通过检 索及查阅，对蛋白功能的具体分析发现，本文所涉及的23个差异蛋白与青光眼的发病、损伤及修复 有密切的关系，提示这些蛋白可能参与到了青光眼发病、损伤修复、免疫调控、抗氧化应激、抗炎 反应、视神经修复、细胞凋亡调控等过程。这对于青光眼视网膜及视神经损伤的修复起到了重要的 作用，证实了睫状体平坦部滤过术降低眼压的效果明确，对青光眼视神经保护具有确切的作用，并 且具有较高的手术安全性。 视网膜血管铺片技术在家兔视网膜血管病变研究中的应用 张志芳潘琳李庆生 中国中医科学院眼科医院中日友好医院 视网膜血管炎(retinal 或静脉较少见，多数是两者均受累，常见眼底反复出血和血管白鞘。它主要发生于年轻人，且视力 受损比较严重拉1。目前，RV的发病机制尚未完全阐明，除了感染和肿瘤等，主要认为是由自身免疫 反应所引起。临床上治疗本病的主导措施是应用糖皮质激素和各种新型免疫抑制剂，但对于这些疗 法的使用仍存在较大争议，此外还有一些对症的药物、激光、手术治疗及中医中药治疗。因此深入 研究RV的发病机理、临床表现，从而找到有效的针对性防治方法就极为重要。笔者认为，视网膜血 管铺片技术是一种研究RV的较好方法，不仅可以清楚地观察到毛细血管的结构、走行和分布，还可 以直观地看到视网膜的出血程度、血管壁及其周围炎性细胞的浸润等RV的形态学改变。 材料和方法 1．实验动物及分组：12只青紫蓝家兔，雌雄各半，体重2—2．5kg，普通级环境下分笼适应性喂养 3天后，随机分为2组，每组6只，分别为正常对照组和RV模型组。 2．RV动物模型的建立：将家兔用水合氯醛(生理盐水稀释)行腹腔注射全身麻醉后，滴用o．4％ 盐酸奥布卡因滴眼液眼表麻醉，用lml注射器针头在下方角膜缘处平行刺入前房，放出o．1ml房水后 使针尖达玻璃体中央，并使针尖背向视网膜，缓慢注入庆大霉素(500ug，用生理盐水稀释至o．1m1)， 正常对照组注入等量生理盐水，而后缓|曼拔针，用棉签轻按针孔数秒后，对晶体无划伤，玻璃体内 无出血者继续进行实验观察。 3．眼球取材及固定：造模7天后摘除家兔同一侧眼球，完整置于10％甲醛溶液中固定72小时。 4．视网膜血管消化铺片制备：用水将固定后的眼球冲洗干净，剪除眼球前节及玻璃体，在视盘中 央沿垂直于血管方向用刀片将其一分为二，再沿垂直于血管方向平行切成2—3段。用显微镊轻轻剥 离视网膜后浸泡于蒸馏水中24小时。3％胰蛋白酶中37℃下消化2小时，而后移入蒸馏水中，用玻 璃吸管轻轻吹打多次至透明状后平铺于干净载玻片上，室温下自然干燥备染。 5．视网膜血管消化铺片染色：视网膜血管铺片在蒸馏水中浸洗5分钟后，o．5％高碘酸溶液室温氧 苏木精复染3分钟后流水轻洗5分钟，梯度酒精脱水风干，置于二甲苯I、二甲苯II中各透明lo分 钟，Dpx封片。 结果 1．视网膜血管消化铺片：视网膜血管网完整显示，形态结构清晰，可以清楚地观察到血管的结构、 走行和分布，视网膜出血及炎性细胞的浸润。 2．正常对照组及RV模型组形态观察 2．1正常对照组：视网膜血管管腔通畅，内皮细胞和周细胞完整而密集，血管及周围未见明显炎 性细胞浸润。(如图1) ．10． 22RV模型组视网膜血管大量红细胞重叠堆积，阻塞管腔，血管管径形态不均匀，管壁细胞稀 疏，部分出现内皮细胞和周细胞的调亡小体，血管及周围有较多炎性细胞浸润。(如图24) 讨论 早在40多年前，Difco实验室通过Difco胰蛋白酶对视网膜进行消化后制备了血管消化铺片。‘， 为视网膜血管的研究提供了一种新的方法。此后，又经过各国学者的不断改进、完善．才发展为今 天的视网膜血管消化铺片技术。视网膜血管铺片技术已在实验研究中运用多年，但绝大部分仅应用 于大鼠实验，家兔实验中应用的相关文献报道甚少。本实验通过对家免视网膜进行血管消化铺片的 操作、摸索，总结以下几点1正确取材，用刀片切成小段，以利于消化完全；2轻轻剥离视网膜， 剥离时有