丹参饮促进胃溃疡愈合作用及其机理研究.pdfVIP

特邀报告 丹参饮促进胃溃疡愈合作用及其机理研究 张洪泉 柳丽 江苏扬州大学医药研究所(扬州225001) 丹参饮是我国传统著名古方。由丹参、檀香、砂仁三味药组成，主治气滞血瘀结于心胃的心脘腹 疼痛，已有众多临床研究表明丹参饮对消化性溃疡具有较好的疗效。目前对胃溃疡的发生机制多认为 与攻击因子和防御因子的失衡有关，本组前期研究发现，在幽门结扎型胃溃疡模型中．丹参饮对胃酸、 胃蛋白酶这两个主要攻击因子无明显影响．本实验着眼于研究丹参饮对胃粘膜部分防御因子的影响， 并观察其对胃粘膜细胞凋亡的作用，深入探讨其抗溃疡的可能作用机制。 1．材料和方法 1．1动物清洁级健康SD大鼠40只，雌雄各半，体重180 g～220 g，由中国科学院上海实验 动物中心提供，合格证号：SCXK(沪)2002—0010。 I．2药品与试剂丹参饮水提醇沉液(每毫升相当于lg生药量)，檀香、砂仁挥发油，由中国药 科大学生药教研室提供，临用前以每250mL丹参饮水提醇沉液配檀香、砂仁挥发油各2mL的比例，用 吐温一80研磨混匀使用。№试剂盒(南京建成生物工程有限公司生产)。PGB放免试剂盒(苏州大学匡 学院提供)。阿尔新蓝(alcianblue 8GX)，上海华舜生物工程有限公司，进口分装，批号：1298．88。 多聚赖氨酸，美国Sigma公司。原位细胞凋亡检测试剂盒(POD)，华美生物工程公司产品。兔抗Bcl一2、 EGFR相关抗原多克隆抗体，SABC免疫组化染色试剂盒，DAB显色试剂盒，均购自武汉博士德生物工程 有限公司。 1．3模型制备大鼠乙酸性胃溃疡模型制备参照0bake法进行。大鼠禁食不禁水24h后，3％戊巴 比妥钠ImL／kg腹腔注射麻醉，无菌操作，自剑突正中向下沿腹中线剪约2cm开口，轻轻拉出胃，将直 后用棉签吸干，生理盐水冲洗后，将胃轻轻送回，并以大网膜包裹，逐层缝合腹膜、腹壁肌层及皮肤， 再次消毒。手术成功后将动物随机分为4组，每组8只，分别为正常组、模型组、丹参饮小、中、大 剂量组，另8只未手术为正常组。术后正常饲养，第二天开始灌胃给药，分别给予生理盐水0．imL／kg (正常组和模型组)、丹参饮1．759／kg、3．59／kg和79／kg，每天一次，连续14d。 1．4标本采集末次给药前大鼠禁食不禁水24h，末次给药2h后，摘眼球取血4ml。于不抗凝试 管中注入2ml，离心取上清，用硝酸还原酶法检测血清No；余血2ml，放入预先加有0．iml消炎痛 检测，均严格按照试剂盒说明进行。大鼠取血后，予戊巴比妥钠过剂量深麻醉处死，剖腹，结扎幽门、 贲门，胃内注入1％甲醛溶液8mL，摘出整个胃并置于1％甲醛溶液中固定lOmin。沿胃大弯剪开．冲洗 后展开平铺t观察胃溃疡情况，测量胃溃疡的最大长径和垂直于长径的最大短径，将两者的乘积作为 溃疡指数(ulcer index，UI)·切下含溃疡边缘约3mm组织在内的溃疡组织块，沿溃疡长径的中点纵切 将之一分为二·投入10％的中性甲醛中固定24h，常规石蜡包埋，4u m厚连续切片，用于AB—P^S染色、 12 第三届海峡两岸中西医结合学书研讨会论文集 细胞凋亡检测和免疫组化染色． i．5 胃壁结合粘液含量的测定取乙酸性胃溃疡模型中胃壁组织，中性甲醛固定，脱水，常规石 蜡包埋，制备5u 脱水，透明，封固。结果判定：酸性粘液物质呈蓝色，中性物质呈红色，中性和酸性混合物里紫色。 标记法(即TUNEL法)检浏细胞稠亡，操作程序按照试剂盒说明书进行。结果判定：捅亡细胞核内呈 现棕黄色颗粒·每张切片随机选取5个高倍视野(x 400)，由瑞医病理图文分析系统计算1000个粘膜 表值。 对照。结果判定：阳性细胞核膜、胞浆着色均为棕黄色，应用瑞医病理图文分析系统进行图象半定量 分析，每张切片随机选取5个高倍视野(X400)，分别测定其平均积分光密度值和阳性细胞所