Galectin-1对大肠癌细胞表型的影响.pdfVIP

第二届全国肠道疾病学术大会论文汇编 一6l一 Galectin—l对大肠癌细胞表型的影响 童华生 张亚历 姜泊 南方医科大学南方医院消化疾病研究所(510515) 大肠癌(colorectalcarcinoma，CRC)是全球的第一、差异蛋白质表达筛选和鉴定 三大常见肿瘤【ll。其5年生存率与其病理分期呈明 1．蛋白质分离和差异点分析 显负相关。目前研究CRC侵袭转移已成为焦点。一 采用17cm 4—7两种固 pH3一lO(线性)和pH 种新概念上的大肠肿瘤——大肠侧向扩散型肿瘤 相pH梯度(Immobilized pHgradient，鹏)胶条对 (colorectallaterally tumor，CLST)因其特 spreading 独的生物学特性可能给大肠癌侵袭转移研究带来启 3软件对三种细胞蛋 DE；通过下载试用版Melanie 示。CLST病理学上主要包括腺瘤和黏膜内癌，形态 白质2-DE图谱差异点进行分析。 学均表现为沿大肠黏膜浅表侧向扩散而少向肠壁深 2．蛋白质鉴定 层侵袭恻，该特点与普通大肠癌易深层侵袭高转移 选取其中40个差异蛋白质斑点进行胰蛋白质 特性迥异。因此CLST可作为大肠癌侵袭转移研究酶原位酶解。利用MOLDI-TOF质谱进行肽质谱指 的负向病变模型。对CLST进行研究一方面可探知 mass 纹图(peptides 其侧向生长可能分子机制，同时对大肠癌侵袭转移 蛋白质2-DE图谱上的表观等电点和分子量及其特 研究亦可能具有潜在的意义。本课题组前期已建立 了一CLST癌细胞系LST—Rlt4J，体外实验已证实其 侵袭力相对弱于SW480和LoVo细胞株，同时利用 emblheidelberg．de／ 基因芯片筛选出了一系列三细胞株差异表达基因． 并对部分基因进行了功能分析，发现差异表达分子 UIGvcsfhtml／msfit．htm)搜索匹配的蛋白质。 在大肠癌侵袭转移中亦发挥着一定的作用【踟。这坚 二、细胞膜GALl对LsT—Rl细胞与胶原蛋白 定了我们在研究CLST中探讨大肠癌侵袭转移的设 I粘附的影响 想。由于蛋白质和基因并非存在着完全的线性关系． 1．GALl在LST-R1细胞中的表达验证 我们利用蛋白质组学方法在蛋白质表达谱层面深入 免疫印迹分析三株细胞GALl的表达．同时采 elec— 该课题的研究。经双向电泳(two-dimensional 用免疫细胞化学和激光共聚焦显微镜进行LST—R1 trophoresis，2-DE)分离三种细胞蛋白质．基质辅助细胞GALl定位分析。 laserdes_ 激光解吸电离一飞行时间(matrix—assisted 2．GALl单克隆抗体阻断 timeof RPMI1640培养液调整LST—R1细胞浓度为l orption／ionizationflight，MALDI-TOF)质谱 分析和蛋白质数据库搜索鉴定差异表达蛋白质。在 这些差异表达蛋白质中我们查阅文献发现差异表达 37℃反应30min．流式细胞仪检测GALl抗体与 蛋白质B半乳糖结合蛋白l(galactose—bindingp舻 L