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果 树 从蔷薇科果树硅胶干燥叶片中制备DNA用于RAPD 分析 何天明 陈学森吴燕 (山东农业大学园艺学院，泰安271018) 摘要野外植物资源考察者常常需要采集大量供分子生物学研究的植物样品，如何创造～ 种简单可行的方法以保证样品中的DNA在运输过程中不被降解，这是许多研究者所希望的。本文 以几种蔷薇科主要树种特别是杳属植物为试材，从DNA提取、模板DNA电泳分析、RAPD扩增和 S_基因型特异PCR几方面对硅胶干燥的样品与传统液氮冷冻的样品进行了综合对比研究。结果表 明：硅胶保存的样品完全可以与传统液氮冷冻的样品得到同样的PCR扩增结果，甚至在减小褐变 影响方面优于后者，且干制样品的DNA纯度均比液氨速冻样品高。综合研究表明，用硅胶干燥法 保存的植物样品完全可以满足后期有关RAPD等分子生物学研究的需要。 关键词蔷薇科，硅胶；DNA#RAPD DNA分子标记在研究野生植物资源时，为了保证所采材料的DNA在运输过程中不被降 解，通常是用冰冻或液氮速冻保存材料。然而，在交通不便的偏远地区开展野外考察时，制氮、 制冷都十分不便，特别是采集大量用于分子标记的植物材料时，研究者常因之为难。 Liston等在我国新疆地区采集了菊科等14科的15种植物，在当地空气温度下干燥了4～6周 备DNA分析的样品[“。因硅胶吸水能力强(自重的31％)，在野外易通过加热(175‘C，】h)而 再生，所以这一方法因其简单、便宜和有效而开始用于野外植物材料的保存口“]。 果树是多年生作物，一些特殊内含物(如酚类、单宁及色素物质)含量高，DNA提取过程中 易发生褐变，同时富含的粘多糖直接影响后期研究中Tag酶的活性，常常导致扩增失败，所以 从果树作物中制备理想的DNA较草本植物为难。在果树资源的野外考察中，是否可通过硅胶 干燥的方法实现野外植物材料的成功保存，这对开展果树资源调查和相关分子系统学研究很 有必要和也很迫切，但目前缺乏这方面相关报道。 】材料与方法 1．1材料 试验于2003年在山东农业大学果树资源与育种实验室完成。试材美娜苹果、平顶香李、红 荷包杏、油桃78、红考密斯梨，采自本校小果园}大樱桃李、小樱桃李以及皮乃孜、大五月杏等 杏品种(品系)分别采自新疆塔里木农垦大学果树资源圃和新疆轮台国家果树种质资源圃。所 有材料均采自树势健壮的成年植株。 1．2方-法 分别用硅胶干燥和液氮速冻的方法保存定量对比研究用的试验材料[5一]，每树种设计2次 基金璜目：国家自然科学基金渖}技部农业科技成果转化基金(2002208)． 238 园艺学进展(第六辑) RNA／ 重复，取平均值。采用CTAB法提取总DNALBJ。基因组DNA提取后，用Genequant DNAcalculator(Phamacia Biotech)测定其浓度和纯度，0．8蛎的琼脂糖凝胶电泳检测基因组 TGCⅪCAAGTAArn～1vrCAA (57一 ACC-3’)和PruC4 TTGAACm37)由齐洁博士提供‘”。PCR反应体系和反应条件见参考文献[8-1。 袁1两种方法保存的蕾薇科不同树种叶片DNA提取过程中的裹现差异 Table1 Different ofDNAextractionfromJ∞Vespreservedwith expression midsilica liquidnRrogen gel，respectively 粼tr称ee感‰箍辫Chl,Iso煳。Pr一商pitafionFru