SARS冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂筛选方法.pdfVIP

SARS冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂筛选方法 陈莉莉。丁宏，陈帅，陈静，沈旭，蒋华良 (中国科学院上海生命科学研究院药物研究所，上海201203) 摘要：SARS是一种传播速度快，死亡率高的疾病，目前没有有效的治疗药物，因此围绕抗SARS药 物的研究一直是各国研究的热点．随着对SARS冠状病毒研究的不断深入，抗SARS冠状病毒的药物 靶标也越来越多．而SARS冠状病毒3CL蛋白酶在病毒生活史中具有重要用，因此成为抗SARS药物 发现的重要靶标之一．本文就近年来有关SARS冠状病毒3CL蛋白酶抑制剂筛选方法的优缺点及应用 前景作一简要综述． 关键词：SARS；SARS-CoV；SARS-CoV3CL。；筛选方法；抑制剂 2002年11月，我国广东省出现了一种导致人呼吸系统衰竭，死亡率大约为10％的疾病。随后 这一疾病迅速在世界范围内传播，涉及到33个国家和地区。2003年3月，WHO将该疾病命名为严 重极性呼吸系统综合症(SevereAcute Respiratory 人民的生命造成了极大的威胁，也给全球经济带来了很大的冲击。因此，如何遏制SARS的传播， 在短时间内发现抗SARS有效药物是个极具挑战性的课题。SARS-CoV 病毒主要的蛋白水解酶可切割SARS=CoV的两个多聚蛋白，在病毒的生命周期中发挥了重要的作用， 因此该酶是抗SARS药物设计的一个理想靶标。目前SARS-CoV3C俨的晶体结构已经测定HI，酶 性质l孓7】和抑制剂筛选18,9]等工作也取得了很大进展。本文主要就SARS．CoV3CLpr口抑制剂筛选方法作 ～简要综述。 1虚拟筛选 虚拟筛选方法已经被广泛地用于药物筛选，它不同于盲目的药物高通量筛选，而是一种典型的 基于结构的药物发现手段，可降低花费和加快药物筛选效率。这种方法借助靶标蛋白的3D结构，． 通过计算机筛选大批化合物文库，以期发现新的先导化合物。因此，这一方法成功的关键在于了解 靶蛋白的结构特征和决定结合配体的筛选标准【Io】。虚拟筛选方法已成功运用于SARS-CoV3CL脚的 3CLp|o 的同源蛋白，根据可遗传的肠胃炎病毒TGEV的主要蛋白(Mp|口)的晶体结构进行同源模建得到3D 模型，然后用分子对接的方法虚拟筛选了SARS．CoV 3CL呻抑制剂。结果发现MDDR数据库中的 73个化合物可同时对接到TGEVM即和SARS．CoV 3CL即的结合口袋中，这一方法说明可用TGEV M呷的晶体结构或SARS-CoV 3CLpm的模建结构进行抗SARS药物的筛选。在SARS-CoV3C俨的 晶体结构测定完成后14．1劲，许多研究组直接根据晶体结构的配体结合口袋，对各种数据库进行虚拟筛 选，缩小可能的抑制剂范围后，再对化合物进行后续的生物学活性测试，可极大地加快抑制剂发现 的效率【13】。我们研究组11卅根据SARS．CoV 3CL呷的晶体结构和同源模建结构的结合口袋，通过虚拟 筛选方法筛选了一个含8000个已知药物的数据库，寻找与SARS．CoV 3CL呻具有潜在结合作用的分 子·在筛选过程中，发现了一种已知药物肉桂硫胺，它是1960年就通过临床测试的五羟色胺拮抗剂。 2分子水平筛选 分子水平的筛选方法大多需要得到纯度较高的SARS．CoV 3CL即，目前大多数的实验室都采用 原核表达的方法，即将构建好的带SARS．CoV 3CL即的质粒转化入大肠杆菌中直接表达蛋白。通过 亲和层析和凝胶过滤的方法等得到纯鼎酶l¨。71。但目前也有研究纽报道刖真核细胞(COS．7)表达 83 SARS-CoV3CLplo【埔l。得到纯度较高的蛋白酶，可进行分子水平的抑制剂筛选。 2