高温α-淀粉酶在黄姜皂苷元提取中的应用研究.pdfVIP

2013’中国生物发酵产业年会 高温Q一淀粉酶在黄姜皂苷元提取中的应用研究 肖华李玉别松涛刘晓光路福平 工业发酵微生物教育部重点实验室(天津科技大学)工业酶国家工程实验室； 天津市工业微生物重点实验室天津科技大学生物工程学院天津300457 【摘要】本研究对高温Q一淀粉酶在黄姜皂苷元提取过程中的作用进行了简单分析， 5，温度90℃，高温Q一淀粉酶的用量为 确定了高温Q一淀粉酶作用的最适条件为：pH 25u／g，反应时间为60rnjn。在该条件下高温Q一淀粉酶对黄姜中淀粉的水解效果最好， 干物质减少率为48．4％，还原糖浓度为46．7mg／Ild，该研究为生物法制备黄姜皂苷元奠 定了基础。 【关键词】高温Q一淀粉酶黄姜皂苷元提取高效液相色谱法 黄姜(Dioscorea ZingiberensisC．H．谢ght)又称盾叶薯蓣，火头根。黄姜根茎作为 激素类药物的原料药，其有效成分是薯蓣皂苷及薯蓣皂苷元【l’2】。是生产薯蓣皂素最主 的纤维素以及一些水溶性苷类、生物碱类、黄酮苷类等化学成分。 黄姜皂苷元的传统提取工艺采用RothI．ock掣5】首创的直接酸水解法，这种方法在提 取过程中会产生大量废水，且废水中BOD和COD浓度很高，污染严重，且皂苷元回收 率较低【6。9】。另外，酸解过程中黄姜淀粉、纤维素等成分没有充分被利用，造成资源的 极大浪费。为了解决这些问题，用反应专一性好、条件温和的酶水解代替酸水解，成为 目前从黄姜中提取皂苷元的优选策略。 黄姜根茎中含有约50％的淀粉，它将皂苷元包裹与屏蔽起来，使得皂苷元的提取十 分困难‘10’111。因此，首先利用酶水解淀粉，然后再利用分离提取或酒精发酵工艺等方 法充分利用淀粉水解产物，不仅将利于皂苷元的释放还创造了更高的经济效益，为实现 黄姜资源的综合利用，高效、环保制备薯蓣皂苷元的工业化奠定基础。 1．材料与方法 1．1实验材料 晾干的盾叶薯蓣：购自河南潢川县 高温淀粉酶(20000u／g)：天津市诺奥科技发展有限公司提供。 362 第四部分酶制剂篇 1．2实验测定方法 1．21还原糖和总糖的测定方法 还原糖和总糖的测定采用3，5一二硝基水杨酸比色法。 ①标准葡萄糖溶液：秤取1009烘干的无水葡萄糖粉末，置于loomL容量瓶中混匀。 浓度为1朗。 原糖浓度为横坐标，相应的OD为纵坐标做标准曲线。 1．4 1-2 1 碟 0．2 O —O．2 j至原秘裱度【鼍／-1) 图卜1还原糖浓度的标准曲线 由图1一l可知，葡萄糖在O．2．0．8 mg／111L范围内与吸光度成线性关系。其回归方程 1．22干物质减少量的测定方法 黄姜在淀粉酶的作用下，将黄姜中的淀粉转化为还原糖。将淀粉酶反应后的黄姜混 合液离心，烘干。测定干物质减少率。 干物质减少率=酶反应后烘干的干物质的重量／黄姜粗淀粉质量木100％ 1．23黄姜皂苷元的检测方法 黄姜皂苷元采用高效液相进行检测。 ①首先，制做皂苷元的标准曲线。称取6mg皂苷元标品，溶于6mL乙腈。超声后 分别取0、0．1、O．2、0．4、0．6、0．8IIlL，乙腈补至1n1L，进行液相分析。 0 O 0 0 藤阻堂 0 0 伽瑚咖蝴咖伽瑚 0