蔓荆子药材及其混伪品DNA条形码鉴定研究.pdfVIP

世界科学技术一中医药现代化★专题讨论：中药资源与鉴定 蔓荆子药材及其混伪品DNA条形码鉴定研究六 张晓存 ，徐 迪 ，孙 伟 ，宋 明 ，刘 霞 ， (1．武汉理工大学化学化工与生命科学学院 武汉 430070； 2．中国中医科学院中药研究所 北京 100700) 摘 要：本研 究应用 ITS2序列鉴别蔓荆子及其混伪品，收集药材和基原植物样本共46份 ，通过提取 基 因组 DNA、PCR扩增和双 向测序获得 ITS2序列，经 CodonCodeAlignerV4．2拼接注释获得序列，应用 MEGA5．0对序列进行分析 比对 ，计算种 内和种间遗传距离(Kimura2一Parameter，K2P)，构建系统发育NJ 树进行鉴定。结果表明，蔓荆子药材基于 ITS2序列的种 内最大K2P遗传距离均小于其与混伪品的种间最 小 K2P遗传距离，NJ树显示蔓荆子药材与其混伪品可明显分开，表现 出良好的单系性。因此 ，应用 ITS2 序列能够准确地鉴定蔓荆子药材及其混伪品。 关键词：蔓荆子 混伪品 DNA条形码 ITS2 doi：10．11842／wst．2014．11．014 中图分类号 ：R282．5 文献标识码 ：A 蔓荆子原名蔓荆 ，始载于 神《农本草经》n1，列为 障中药材的用药安全 ，准确鉴定蔓荆子的真伪显得 上品。2010版 《中国药典》收录的蔓荆子为马鞭草科 尤为重要 。 植 物 单 叶蔓 荆 Vitex trifoliaL．var．simplicifolia DNA条形码技术是基于分子生物学发展起来 Cham．或蔓荆 VitextrfioliaL．的干燥成熟果实 ，具有 的物种分类和鉴定的新技术 ，是利用一段标准 DNA 疏散风热、清利头 目的功效 ，用于治疗风热感 冒头 序列作为标记来实现快速 、准确鉴定的手段 [121。陈 痛、齿龈肿痛 、目赤多泪 、目暗不 明、头晕 目眩等症 士林等首次提出将 ITS2作为药用植物标准 DNA条 状 【。现代研究表明，蔓荆子含挥发油 、黄酮类等多 形码ll31，选用 ITS2为主体序列 ，psbA—trnH为辅助序 种化学成分 ，有降压 、抗肿瘤 、抗衰老等新的作用 ， 列实现对 中药材的鉴定[14-161，该技术已经在冬虫夏 具有很好的药用价值1～1。近年来 ，蔓荆子的混伪品 草 【、半夏 【]、车前子等 【]中药材的鉴定中得到了验 常在药材市场上 出现 【。蔓荆子与牡荆 V．negundo 证。本研究对蔓荆子及其混伪品进行 DNA条形码 L．vaY．cannabfiolia(Sieb．etZucc．)Hand．一Mazz．、黄荆 鉴定研究，以准确鉴别中药材蔓荆子。 V．negundoL．、南烛 VacciniumbracteatumThunb．、续 1 材料 随 子 EuphorbialathyrisL．和 山鸡椒 Litseacubeba (Lour．Pers．的干燥成熟果实牡荆子 、黄荆子 、南烛 本研究共涉及 52个研究对象 ，其中蔓荆子药 子 、千金子 、荜澄茄 的外观性状极为相似 ，难 以区 材样本 12份，来源于北京 、新疆乌鲁木齐 、贵州贵 分 ，且千金子有毒 8【_“1。为了确保蔓荆子的质量 ，保 阳、重庆 、广西玉林 、安徽亳州 、河北安 国、四川成 都 ；蔓荆基原植物样本 4份 ，来源于北京 、陕西西 收稿 日期 ：2014一l1-05 安 、云南西双版纳；单叶蔓荆基原植物样本 8份 ，来 修 回 日期 ：2014-l1—18 ★ 科学技术部 国家重大科技专项(2014ZX09304—307—001—020)：中药新药安全性检测技术与标准研究——中药原料药混伪品分子基因鉴定 技术与标准，主课题负责人 ：肖红斌 ，子课题负责人：刘霞；武汉理工大学 自主创新研究基金本科生项 目(146720018)：麻黄及麻黄根中麻