一种用CdSe半导体纳米晶制备高效率荧光编码微球的新方法.pdfVIP

2007生物物理联合会议 一种用CdSe半导体纳米晶制备高效率荧光编码微球的新方法 龌2闫玉禧3牟颖12‘金钦汉1’3 1浙江大学分析仪器研究中心，浙江，310058； 2吉林大学分子酶学工程教育部重点实验室，长春，130023； 3吉林大学化学学院，长春，130023 (*Email：ymu100@yahoo．com．cn) 荧光微球是指直径在纳米级至微米级范围内，负载有荧光物质，受外界能量激发能发出荧光的固体微 粒。其外形可为任意形状，典型外形为球形。荧光微球的载体多为有机或无机聚合物材料。近几年来，荧 光微球以其稳定的形态结构及较高的发光效率，在细胞表面抗原检测(cell-surfaceantigen tracer)、血液流动检测(bloodflow detection)，、细胞噬菌示踪(phagocytosis 量药物筛选(High-ThroughputScreening)和细胞流式计数测定等许多领域得以广泛应用。通常，上述的 荧光微球中负载的荧光物质大多是有机染料如罗丹明、FITC等，但是，由于有机荧光染料的光稳定性差且 纳米晶的出现无疑使研究者们见到了曙光。无机半导体纳米晶以其独特的光电性质几乎完全克服了有机荧 光染料的上述缺点，并且半导体纳米晶的发射峰锐且窄而吸收峰宽，同一激发波长可以同时激发几种不同 发射峰位的半导体纳米晶，这不仅简化了荧光编码微球的制各而且使其应用更加方便、有效。特别是当把 不同粒径的纳米晶定量地导入同一个微球就可实现对微球的光学编码，进而实现高通量快速检测。目前， 成功实现二者集成的方法主要有两种：一是把荧光纳米晶与聚合物单体直接混合然后聚合即原位合成法， 无疑这是一种最简单的最直接的集成方法，但是经过聚合后，纳米晶的荧光强度因部分猝灭下降，因此这 样制得的荧光微球其荧光性质难以控制；二是溶胀法，即把有机相的纳米晶溶于聚合物微球的良溶剂中， 然后把微球加入该溶剂中，通过溶胀行为纳米晶就会被导入微球，这样制得的荧光微球其荧光性质与所用 纳米晶基本～致。但这种方法制得的荧光微球的缺点是在应用过程中纳米晶会泄漏，而且其“空心”结构 导致了对分析试剂的非特异性吸附，大大增加了分析检测的难道。 综上所述，虽然实现了纳米晶与高分子微球的集成，但是如何解决二者集成过程中纳米晶标记数量的 精确可控以及集成后纳米晶的泄漏问题，仍然是一个难题。本文首次提出～种以微乳液为溶胀体系来实现 不同大小的CdSe纳米晶的同时导入来制备荧光编码的聚苯乙烯微球的方法。其步骤为：(1)采用分散聚合 m-5 工艺合成粒径范围从l|I pm不同大小的聚苯乙烯微球；(2)通过溶胀处理把不同粒径的CdSe纳米晶均 匀、定量的导入微球内部即得发光高效的荧光编码微球。由于微乳液的每个小油珠均可作为溶胀反应的微 反应器，这样溶胀后的微球仍然保持较“紧凑”的结构，不仅实现了纳米晶标记数量的基本可控而且由于 经过溶胀过程纳米晶已进入微球内部从而基本上避免了纳米晶的泄漏。这种编码微球经过进一步的表面修 饰可以与蛋白质偶联，因而在生物化学、分子生物学、细胞生物学及免疫学等领域有着广阔的应用前景。 ．29． 2007生物物理联合会议 此外这样制得的荧光微球较之传统有机染料微球具有光稳定性好、不易光褪色等优点，而且方法本身操作 简单、重现性好。 本文还探索了荧光编码微球合成的最佳条件即不同大小纳米晶吸附的先后顺序：实验结果证明，先使 粒径较大的纳米晶被吸附效果更好一些，原因很简单，如果使微球先吸附小粒径的纳米晶，则由于纳米晶 被吸附的过于紧凑而使微球的吸附性明显下降，使下一步大粒径纳米晶的吸附受到较大影响，而反之则恰 好避免了这种现象的发生。我们采用了这种方法得到的一系列小粒径荧光编码微球，以发射峰位分别为 505nm和607rim的纳米晶为例，用荧光光谱仪进行了表征，其数据如图所示．同时分别从分散稳定剂的含量、 单体和引发剂的用量以及溶剂极性方面研究了对聚苯乙烯微球粒径和分布的影响。 (n．日—露∞c里uI 兮．B)^秀c窘呈 mⅫ 蛳 啪 啪