蜡样芽孢杆菌905铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆及原核表达.pdfVIP

植物病理学研究进展 蜡样芽孢杆菌905铜锌超氧化物歧化 酶基因的克隆及原核表达+ 莫小丹料王勇军王琦”‘ (中国农业大学植物病理学系，北京100094) TheGene DismutasefromBacillus EncodingCuZn-Superoxide cereus905andIts inEscherichiacoli Expression MO ． Xiao．dan，WANGYong-jun，WANGQil Plant 100094，China) (Departmentof Pathology，ChinaAgriculturalUniversity，Beijing 利用植物有益内生细菌进行植物病害生物防治和提高作物产量是当前农用微生物研究的 一个热点。在我国，以植物有益内生细菌为主体的植物微生态制剂已经进入田间的农业生产 应用，取得了良好的经济和生态效益。细菌在植物上发挥其功能的关键是细菌可以在作用部 位很好的定殖。研究发现，在细菌与植物相互作用时，会引起该区域的氧自由基浓度的急剧 升高；同时植物也会代谢分泌出一些酚类物质，这些物质都会产生氧自由基¨，2J。在该环境 中定殖的细菌必须克服这种氧自由基对细胞的毒性。 超氧化物歧化酶(Superoxide 而CuZn．SOD定位在胞壁空间或者胞外以清除细胞膜外的氧自由基Mj。 Bacilluscereus 905是本研究室从小麦体内分离获得的一株具有很好的促生和防病效果的 细菌，在小麦体内及根围定殖能力强。为分析其定殖的分子机制，根据已公布的蜡样芽孢杆 菌的全基因组序列及本实验室已获得的B．cereus 主相互作用时发挥的重要功能。 1材料与方法 列设计引物，利用PCR方法扩增B．cereus coli 体pET-22b-sodC，转化Escherichia 种类。 ·基金项目：“863”计划资助项目(2006AAl0A211)。 ”第一作者：莫小丹(1982～)，女，广西区桂林人，硕士，主要研究植物病害生物防治方向，E— mail：sunny一120—06@163．corno 348 ． 2结果与分析 全K(s—c)。该基目由537 bp组成，编码179个氨基酸残基．根据泼蛋向的分子量大小和 基酸残基巾，甘氧酸(G)青量最高，达到12 特征墩。 coil 构建表达戴体pET-22b-sodC．转化Escherkhia 反相染色后．较朱诱导样品相比，诱导后的细胞裂解液出现一条明娃的亮带，表明谈基因表 达出的蛋门表现出SOD活性(罔1)SOD酶活测定也发现诱导后细胞裂解液的SOD酶活有 了硅著的提高，化学抑制法群出诱导出的SOD蛋白经KCN和H，0：处理后，其活性受到很 犬程度上的抑制，而氯仿／乙醇对其活性没有影响，确定r诱导表达出的蚩自为CuZn—SOD (圈2) 2 wIth Figu雌1 aefl“tyte啦of巨coⅡFigure Enzymatic Native—PAGE chemicalinlfibita毗methods BL21【pET一22b—scdC】by 1 Ecr／i l：EcoliB121(pEl、一22h—sodC)