细菌的整合子及其介导的耐药研究进展.pdfVIP

合，而且没有明显的不良副作用，这是非常诱人的。随着RNAi技术不断地发展，相信它将是一项不 容忽视的抗肿瘤新技术，将它应用于前列腺癌的基因功能研究和基因治疗研究，会在前列腺癌的诊 断、基因治疗等方面带来了新的希望。 目前对于RNAi 的研究还不够完善，如何将 siRNA 转移到体内所有的肿瘤细胞中，并能够稳定持 久地表达是RNAi 技术治疗肿瘤的关键，载体选择等方面也存在实用性与安全性等难题。此外，从目 前 RNAi 研究的现状来看，在哺乳动物细胞中，RNAi 并不能完全阻断基因的表达，尤其是异常高表 达的基因，这也将影响对肿瘤的治疗效果。 细菌的整合子及其介导的耐药研究进展 1 1 1 2 李 超 周铁丽 刘庆中 李向阳 1温州医学院附属第一医院检验科 2 温州医学院附属第二医院检验科 近年来由于抗菌药物的滥用，病原体对抗菌药物的耐药性日趋严重。在过去20年里，人们对细 菌耐药性产生的机制主要集中在基因突变的研究中，认为基因突变的累积是细菌产生耐药性的重要 机制。整合子（integron）的概念最初由Stokes和Hall等在1989年首次提出，近年来国内外学者通 过大量实验证明，整合子是细菌尤其是革兰阴性杆菌多重耐药迅速发生的重要原因，基因盒和整合 子系统在耐药基因的捕获和扩散中的重要地位已确立。本研究参考近年来国内外相关文献，就整合 子的特性、分类、传播及检测方法做一综述。 一、整合子的一般特性 整合子是一个具有捕获外源基因并使之转变为功能性基因的表达单位，起源于细菌的基因突变， 是运动性的DNA分子，主要见于革兰阴性杆菌，如肠杆菌科、假单胞菌属等，但近年来随着研究的深 入，在谷氨酸棒状杆菌和分枝杆菌中也分离出整合子，我国学者在粪肠球菌中也发现了整合子及相 应的耐药基因盒。整合子定位于染色体及具有广谱宿主的质粒或转座子上，包含两个保守的DNA片段 （conserved segament，CS），两保守片段之间是长度和序列可变的区域，又称为可变区（variable region）。在可变区内可插入编码某种功能的基因，如耐药基因等，称为插入盒（inserted cassette）， 亦称基因盒（gene cassette）。 二、整合子的结构 整合子两端是一段高度保守序列，分别称作5′CS和3′CS，左右分别被反向重复末端序列Iri与编 码溶解Tnir的基因隔开，中间为可变区。 5′CS区有一个编码整合酶（integrase）的intⅠ基因、一个基因重组位点attI及启动子。5′CS 内的启动子区包括两种，即整合酶启动子（Pint）和可变区启动子P1（又称Pant或Pc）。P1距5′CS 内边界214个碱基，在一些整合子中，P1下游119bp处还有第二启动子P2。intI基因负责催化attI和 attC上的基因盒的整合及切除。各整合子在5′-CS末端均保持高度的相似性。 ～696～ 在3′CS端由于某些基因的插入或删除，使3′CS端长度不定，有的整合子没有3′CS。在3′CS区域常 见的有3个ORF：季铵盐化合物及溴化乙啶的耐药基因（qacE△1）、磺胺耐药基因（Sul1）、功能不 明的ORF5。有的整合子的3′CS除3个ORFs外还包含其他序列，如ORF6或ORF6的一部分。另外在3′端还 有编码转座功能的转座基因序列（IS），IS可介导整合子在染色体或质粒的转座及在细菌间的传播。 attI是整合子的特异性基因重组位点，包含7个碱基对的片段GTTRRRY（R代表嘌呤，Y代表嘧啶）。 重组时交叉的位点位于一个核心序列GTTRRRY的G碱基和下一个核心序列的第一个T碱基之间，attI 活性位点长40～70bp，大部分位于5′CS，其余由第一个基因盒的前6个碱基构成，如果整合子中不存 在基因盒，则由3′CS或转座基因tni组件构成其余部分。 可变区由一个或多个外来插入的基因盒组成。每个基因盒由一个结构基因（多为耐药基因）及 与3′末端毗邻的一个反向重复序列attC组成。由于第1个发现的attC位点有一个59bp长度的片段，所 以也称attC为“59bp片段”（59base element，59be）。尽管attC位点的长度从57bp到141bp不等， 但它们都有共同的特点：每个attC位点的两端分别为一个7个碱基