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人热休克蛋白72(HSP72)ELISA试剂盒
原理
本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗人 HSP72 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 HSP72与单抗结合，加入生物素化的抗人HSP72，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测OD值，HSP72浓度与OD值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中HSP72浓度。
试剂盒组成（2-8℃保存）
板96孔 10×标本稀释液（Sample Buffer） 12ml 20×浓缩洗涤液（Wash Buffer） 50ml 标准品： 2瓶 第一抗体工作液（Biotinylated Antibody） 12ml 终止液 准备试剂与收集血样
收集标本：血清、血浆（EDTA）、细胞培养上清液、组织匀浆等裂解产物尽早检测，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20 ℃或-70 ℃混匀，配成0pg/ml的溶液设标准8管，管加入标本稀释液0ul。在第一管中加入0pg/ml的标准品溶液00ul混匀后用加样器吸出00ul，移至第二。如此反复作对倍稀释，从第七中吸出00ul弃去。第八为空白对照。标本稀释液用蒸馏水作1:0倍稀释（1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）
标本激活方法
1. 将450ul标本稀释液加入到一支1.5ml进口聚丙烯管中,再加10ul血清或血浆标本。
2. 加20ul 1 N HC,盖紧，上下混匀。2－8℃放置60± 2分钟。
3. 加20ul 1 N NaOH,盖紧，上下混匀。
4. 即用，或放-20/-70℃保存3天。计算结果时乘以稀释倍数50。（注意：不同的标本HSP72的水平可能有较大差异，请根据实际情况灵活掌握稀释度）
加样：每孔各加入标准品或待测样品（已激活）100ul，将反应板充分混匀后置37℃120分钟。
洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。
每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
洗板：同前。
每孔加酶标抗体工作液100ul。将反应板置37℃30分钟。
洗板：同前。
每孔加入底物工作液100ul，置37 ℃暗处反应15分钟。
每孔加入100ul终止液混匀。
30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
结果计算与判断
所有OD值都应减除空白值后再行计算。
以标准品8000、4000、2000、1000、500、250、125、0 pg/ml为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上作图，画出标准曲线。
根据样品OD值在该曲线图上查出相应HSP72含量，再乘上稀释倍数即可
1. 灵敏度：最小的HSP72 检测浓度小于pg/ml。
特异性：可同时检测重组或天然的人HSP72。不与
1. 以上标准孔及待样品均建议做复孔，每次测定应同时标准曲线。
2. 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。
3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥。
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。
5.
上海西唐生物科技有限公司 电话:021 :westang@163.com
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