强直性脊柱炎的外周血CD_4-＋T淋巴细胞双向电泳技术.pdfVIP

110 解剖学研究 2011年第 33卷第 2期 AnatRes，2011，Vo1．33，No．2 · 论 著 · 强直性脊柱炎的外周血CD4+T淋巴细胞双向电泳技术 龙光华， 万 勇， 邱芳华 ， 粱堂钊， 王 乐 (中山大学附属第一医院脊柱外科，广东广州510080) 摘【 要】 目的 优化双 向凝胶电泳的实验步骤，总结出一套适用于强直性脊柱炎的外周血 cD T细胞的双向凝胶 电泳技术。方法 对双向电泳实验中的关键环节 ：样本处理 ，上样方法 ，聚焦条件等进行调整与优化，硝酸银染色后进行凝 胶图像比较。结果 采用 pH4—7胶条 ，用免疫磁珠分离外周血cD T淋巴细胞 ，Cleaning．up试剂盒沉淀蛋白，所得双向电 泳图谱清晰，分辨率高 。建立了稳定的2一D技术。结论 本文首次报道能得到约 800个点 的强直性脊柱炎的外周血cDT 淋巴细胞的蛋白电泳图谱 ，为强直性脊柱炎的外周血CDa+T细胞蛋白组研究奠定了基础。 【关键词】 强直性脊柱炎； cD+T淋巴细胞；蛋 白组学； 双向电泳 Two-dimensi0nalpolyacrylamide gelelectrophoresis techniquesfor ankylosing spondyliftspatient’SCI)J T cells in peripheralblood LONGGuang-hua， WANYong， QIUFang—hua，LIANGTang-zhoo， WANGLe．Departmentofspine Surgery，TheFirstAffiliatedHospital，SunYat—senUniversity，Guang~hou510080，China A【bstract】 Objective Toptimizetheexperimentaltwo—dimensionalgelelectrophoresissteps，andtosummarizasetof ankylosingspondylitisforCD4 Tcellsinperipheralbloodoftwo—dimensionalgelelectrophoresis． M ethods Variousconditionsof serumproteomic2-DEwereadjustedandoptimized，includingsamplepreparation，sampleloadingmethods，iso—electronicfocusing (IEF)．Comparedthemapsaftersilvernitratestaining．Results Wegotclearandhigh—resolution two—dimensionalelectrophoresis mapbyusingIPG inpH4—7， SeparatingCD4 Tlymphocytesfrom peripheralbloodbyimmun0magneticbeads， andprecipitating proteinwithCleaning—upkit，andasteady2-DEtechniquewasstablished．Conclusion Thisisthefirstarticletobereportedabout two—dimensionalelectrophoresismap which got 800 pointsaboutperipheralblood CD4 T lymphocyte in ankylosing spondylitis patients，whichpavethewayofrtheproteomicresearchofrankylosingspondylitispatientsCD4+Tcellsinperipheralblood． K【eywords】 Ankylosingspondylitis； CD4 Tlymphocyte； Proteomics； Two—dimensionalpolyacrylamidegel electrophoresis(2-DE) 强直性脊柱炎(ankylosingspondylitis，AS)主要