免疫组织化学染色法在喉毛细淋巴管研究中的应用.pdfVIP

维普资讯 l50 2007年第 29卷第 2期 AnatRe， o7 ol ， ： · 技 术 方 法 · 免疫组织化学染色法在喉毛细淋巴管研究中的应用 刘跃光 王 莹 冯克俭 李 静 (牡丹江医学院解剖学教研室，黑龙江 牡丹江 157011) 摘【要】 目的 评价免疫组织化学染色法在喉淋巴管研究中的作用。方法 ：利用层黏蛋白单克隆抗体标记毛细血 管和毛细淋巴管的基底膜对喉组织进行免疫组化染色。结果 毛细血管由于内皮细胞外有一层完整的基底膜管壁呈现连 续的棕褐色．而毛细淋巴管 由于内皮细胞外缺乏基膜管壁常不显色。结论 免疫组织化学染色法在喉毛细淋 巴管的研究 中是一种较为准确且客观的方法。 【关键词】 免疫组化； 毛细淋巴管； 喉 在喉淋巴管的形态学研究中。过去多采用淋巴管间接 可将其认为是血管外 ，大多数 的管腔样结构，因无特征性 注射法、半薄切片光镜观察法和超薄切片电镜观察法等方 不同，而难以定论为血管或淋巴管或组织间隙(图 1)。 法。这些方法虽然从宏观到微观提示了喉淋巴管的大体形 2 免疫组织化学染色的切片 态结构 、光镜下结构和超微结构 ．但关于如何在光镜下区 分较小的淋巴管与血管以及毛细淋巴管和毛细血管 ，多年 2．1 大 鼠喉组织石蜡切片经兔抗 鼠层黏蛋 白免疫组织化 以来却一直没有获得较理想的方法 ，本研究利用免疫组织 学染色 ，同一张切 片光镜下可见毛细血管的管壁呈现连 化学染色法对大鼠喉组织进行 了毛细淋巴管及毛细血管 续的棕色 ，而毛细淋巴管 的管壁则不显色或呈弱阳性 ，两 的染色观察，寻求一种更好地显示毛细淋巴管和毛细血管 者区分十分明显。从形态上看 ．呈棕色的血管形状较规 的方法 ，以便为毛细淋巴管和毛细血管的鉴别提供可靠的 则 ，管壁厚 ，而不显色的毛细淋 巴管管腔较大 ，形状不规 实验依据。 则 ，管壁相对较薄 ，胞核略突向管腔 ，多位 于黏膜层 (图 2)，黏膜下层淋巴管可见瓣膜 ，偶可见管腔内淋巴细胞 1 材料与方法 (图3)。大 鼠喉的毛细淋巴管和淋巴管也存在于肌层和外 1．1 大鼠lO只，重 200～300g。常规麻醉 、开腹。在喉各 膜疏松结缔组织 中，在软骨和韧带中未见到毛细淋 巴管 区随机取 1块组织块 ，置 lO％的中性甲醛中固定 24h，流 和淋 巴管。 水充分冲洗 ，经 70％、80％、9o％、95％、100％酒精逐步脱 2．2 用 PBS缓冲液替代层黏蛋 白作为一抗进 行免疫染 水，二甲苯透明，石蜡包埋。 色 ，光镜下可见喉黏膜下的所有管腔样结构均不显色 ．而 1．2 主要试剂 兔抗 鼠层黏蛋 白单克隆抗体．SABC型免 只显示复染后的颜色，即细胞核呈淡蓝色 (图4)。 疫组化染色试剂盒 (即用型)，DAB显色试剂盒 ；以上试剂 3 讨 论 均为武汉博士德公司生产 1．3 方法 石蜡切片常规脱蜡至水。滴加过氧化酶阻断 喉的毛细淋巴管主要集中于如何在组织切片上黏膜 溶液 ，消除内源性过氧化酶的活性 ，室温下孵育 10min， 层和粘膜下层 ，辨认 出正常的毛细淋巴管及观察他们在病 PBS冲洗。滴加正常山羊血清封闭液，室温 20min．甩去液 理状况下的改变 ，是研究喉肿瘤的淋巴管变化 以及区域淋 体 ，滴加适当稀释的一抗，室温 1h，PBS冲洗。滴加生物 巴结转移的前提 ，然而，在喉器官内淋巴管