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正交设计在三七多糖提取中的应用 刘禄明 08自动化（2）班 200810320220 摘 要 ：目的 优选三七多糖的提取工艺。 方法 设置四因素三水平正交实验提取三七粗多糖。 结果 最佳提取方案为：料水比=1：40；提取次数3次；每次提取时间为3h；醇沉浓度为乙醇浓度达2/3。结论 正交实验后的最佳方案提取量稳定，方法简单、可行。 关 键 词：正交试验；三七多糖；提取 三七(Panax notoginseng)是一种名贵的中药材，人参属植物的一种。《本草纲目》记载：味微甘而苦，颇似人参之味。传统中医把三七主根作为入药的主要选择,其主要成分为皂甙、多糖等。多糖广泛存在于中草药中，现代药理表明，多糖是中草药发挥独特疗效的重要物质基础。然而有关三七多糖的研究却不多见[1]，为了更深入的研究三七多糖，本实验采取正交实验对三七多糖进行提取，对多糖提取的最佳工艺进行研究。 1．材料、试剂和仪器 1.1材料与试剂 三七（Panax notoginseng）购自吉林市九鑫药业公司，经吉林医药学院药学院雷均涛副教授鉴定为正品。葡萄糖、乙醇、氯仿、异戊醇、浓硫酸、蒽酮均为国产分析纯。 1.2 仪器与设备 电磨机，HH-601超级恒温水浴（华峰仪器有限公司）；GYS-2不锈钢电热恒温水浴箱（北京市医疗设备厂）；HZQ-C空气浴震荡器（哈尔滨东联电子技术开发公司）；GZX-DH-50X55-S电热恒温干燥箱（上海跃进医疗器械厂）；721可见分光光度计（上海欣茂仪器有限公司）；HC-TP—12型架盘天平（天津市天马仪器厂）；LXJ-Ⅱ型离心沉淀机（上海医用分析仪厂）。 2．方法 2.1正交实验提取三七粗多糖 根据文献资料及预实验设计提取工艺的正交因素水平（见表1），设立四因素三水平L9(34)表进行正交实验。 表1 因素水平表 水平 A B C D 料水比 水提次数 提取时间 醇沉浓度 1 2 3 1：20 1：30 1：40 1次 2次 3次 1小时 2小时 3小时 2：3 3：4 4：5 将粉碎的三七粉18g分为9组，每组2g于小烧杯中用无水乙醇浸泡祛除色素，离心常温干燥得到处理后三七粉,按照正交表1前三因素安排，90℃水浴提取，离心取上清液，将提取液均浓缩至20ml，按正交表1加入相应体积乙醇醇沉，静置过夜，乙醇、乙醚洗涤，离心弃上清，60℃干燥后称重。 2.2脱蛋白 初次提取的粗多糖中还有较多的蛋白质，实验特加入sevag法[2]进行蛋白质脱离。将粗多糖溶于水，将等体积Sevag液（氯仿：异戊醇=4：1），空气振荡浴90r/min10分钟，静置分液取上层，离心变性的沉淀（蛋白质），再次醇沉干燥。 2.3蒽酮硫酸法测定多糖含量 2.3.1蒽酮试剂的配制：精确称取蒽酮0.2g至烧杯中，缓慢加入100ml浓硫酸，搅拌至黄色透明液，转移至棕色瓶中保存，临用鲜配。 2.3.2标准曲线的制作：精确称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1020g ，100ml容量瓶定容备用。分别取葡萄糖标准溶液0.05，0.10，0.20，0.30，0.40，0.60，0.80ml，用蒸馏水补到2.00ml；分别加入5.00ml蒽酮试剂，迅速浸入冰水浴中冷却，各管加完一起进入沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸10分钟取出，用自来水冷却，室温放置10分钟左右，于620nm比色。以同样处理的重蒸馏水为空白进行比色。绘制标准曲线，得回归线方程：Y=11.197X-0.0018（R2=0.9997），Y：测定出的A值；X：浓度（mg/ml）。 2.3.3测定各个样份多糖含量 将1-9号脱蛋白后粗多糖，各取5mg溶于50ml蒸馏水中，定容于50ml容量瓶，各取2ml加入5ml蒽酮试剂，葡萄糖标准曲线法测定A值，A值与提取物中多糖浓度呈回归线方程关系。 2.4 验证试验 取三份同批三七粉样品根据正交表的最佳试验结果，即料水比=1：30，水提3次，每次提取时间3h，醇沉的乙醇浓度为2/3，进行可靠性和重复性验证，测定多糖含量平均为65.3%，粗多糖得率平均为5.8%，与其他研究者的报道相近[3]。 3.结果 正交实验结果及级差分析见表2，方差分析见表3。 正交实验指标=实验提取的粗多糖量×对应的测定A值 表2.正交表结果和级差分析表 编号 A B C D 粗多糖量（mg） A值 指标 1 1 1 1 1 102.2 0.304 31.069 2 1 2 2 2 83.7 0.314 29.422 3 1 3 3 3 322.5 0.185 59.663 4 2 1 2 3 117.7 0.196 23.069 5 2 2 3 1 286.5 0.235 67.328 6 2 3 1 2 165.3 0.255 42.151 7