淀粉酶粗酶液最适反应温度的测定.docVIP

本科学生实验报告 姓名： 学号： 学院： 专业、班级： 实验课程名称＿ 指导教师及职称 开课学期 至 学年 学期 云南师范大学教务处编印 实验序号及名称：实验三、淀粉酶粗酶液最适反应温度的测定 实验时间： 2014.5.7 实验地： 睿智3栋121实验室 实验目的： 了解不同温度条件对酶活性的影响，掌握酶最适反应温度的测定方法。 实验原理： 酶促反应与一般化学反应一样，受温度的影响，反应速度随温度的升高而加快，但因为酶是蛋白质，在温度升高的同时蛋白质的变性速度也在加快，从而又会使反应速度变慢，直至使酶完全失活。因此温度对酶促反应速度的影响具有双重性，其表现是两种对抗效应的综合效果。所以只有在某一温度范围内时，酶促反应速度才会随着温度的升高而升高，达到最大时的反应温度称为酶作用的最适温度。 实验材料 （一）材料 1.淀粉酶发酵粗酶液 2.0.1mol/L，pH5.5的乙酸-乙酸钠缓冲液 配制方法： （1）在1000mL烧杯中加入800mL去离子水。 （2）加入11.57g三水乙酸钠和0.85mL冰乙酸于烧杯中，搅拌溶解。 （3）测定溶液的pH，若pH偏离5.5，用乙酸溶液或乙酸钠溶液调节至5.5。 （4）用去离子水定容至1000mL。 （5）室温储存，用前要检查pH。若要长期储存，需加入0.2%的叠氮化钠来防止微生物生长变质。 3. D-葡萄糖（C6H12O6）标准液，浓度为1mg/mL 4. 2%（w/v）可溶性淀粉溶液（现配现用） 称取2.0克可溶性淀粉，用约80mL缓冲液调匀，加热煮沸 直到淀粉完全溶解； 5. DNS试剂 （二）仪器 1.试管及试管架 2.10mL离心管 3.离心机 4.移液器 5.电子天平 6.恒温水浴锅 7.pH计 8.涡旋混合器 9.紫外可见分光光度计、比色皿、记时器 10.电磁炉、搪瓷缸 实验方法、步骤及注意事项： 1.本实验在室温至70 ℃之间选择不同温度测定淀粉酶粗酶液酶活力，以找出酶在此条件下的最适温度。反应pH为5.5。 2.用缓冲液稀释酶液至合适倍数。 3.取18支试管，分别按下表编号并放入相应温度的水浴中 试管号 对照 1支 反应 2支 对照 1支 反应 2支 对照 1支 反应 2支 对照 1支 反应 2支 对照 1支 反应 2支 对照 1支 反应 2支 反应温度 室温 30℃ 40℃ 50℃ 60℃ 70℃ 4.按淀粉酶酶活测定方法测定在不同温度条件下淀粉酶发酵粗酶液的酶活力。 5.计算结果 6.结果处理：列出不同温度下酶活力的实验测定数据，并绘出温度曲线，找出最适温度。 注意事项： 1、每个同学都参与实验 2、称量天平分开使用 3、称量器皿用后摖净后再使用，避免叉污染试剂。 4、使用前检查仪器设备是否完好，使用后及时清理干净。 实验结果分析： 结果 温度 OD A B 平均值 室温 2.681 2.698 2.690 30 2.764 2.786 2.775 40 2.924 2.935 2.930 50 2.857 2.903 2.880 60 2.641 2.721 2.681 70 2.630 2.363 2.497  六、实验总结 7、教师评语及评分： 签名： 年 月 日