牦牛IFN—γ基因的表达及其产物的生物学活性分析.pdfVIP

中国兽医科学 2008，38(11)：983989 ChineseVeterinaryScience 中图分类号 ：S852．42 文献标识码 ：A 文章编号 ：l673—4696(2008)110983—07 牦牛 IFN—y基因的表达及其产物的生物学活性分析 王生富，窦永喜，陈国华 ，贾怀杰，房永祥 ，景志忠 (中国农业科学院兰州兽医研究所 家畜疫病病原生物学国家重点实验室 农业部公共卫生重点实验室 甘肃省动物寄生虫病重点实验室 ，甘肃 兰州 730046) j 摘要：用植物血凝素和脂多糖诱 导牦牛外周血淋 巴细胞 ，提取细胞 总RNA，利用 RT—PCR技术克隆了 牦牛IFN一)，(YakIFN—y)基因，然后设计了1对表达引物 ，从 pGEM—YakIFN)，载体上扩增 YakIFNy成熟蛋 白基因，将牦牛 IFN—基 因与表达载体 pET一30a连接 ，构建 了重组表达质粒 pET一30一YakIFN—y。用 IPTG 诱导表达的可溶性表达产物经镍柱亲和纯化，用纯化 的重组 YakIFN)，蛋 白进行 了MTT、抑制肿瘤细胞增 殖和细胞病变抑制的生物学特性研究。结果显示，成功克隆和表达 了YakIFN一)，基 因；序列分析表明：克隆 的YakIFN～)，基因序列与 GenBank上登录的黄牛 IFN )，基 因序列的同源性为99．0 。SDS—PAGE分析和 Western—blot检测证实，获得 了高纯度 的重组 YakIFN—y蛋 白。重组 YaMEN一)，(rYaklFN—y)对伪狂犬病病 毒的活性单位为2．2×10U／mg。表明表达并纯化的rYakIFN一)，蛋 白具有较高的生物学活性和干扰病毒 复制 的活性 。 关键词 ：牦牛 ；IFN一)，基因；表达；生物学活性 Expression ofyak interferon— matureprotein geneinEscherichiacoli and bioactivityanalysisoftheexpressedproduct WANGSheng—fu，D()U Yongxi，CHEN Guohua，JIA Huai—jie，FANG Yongxiang。JING Zhi—zhong (KeyLaboratoryo，、AnimalParasitologyofGansuProvince~KeyLaboratory0、VeterinaryPublicHealth oftheMinistry0fAgric’ulture,／StateKeyLaboratoryo}VeterinaryEtiologic’alBt0togyl“nzhou VeterinaryResearchIt~stitute，ChineseAcademyofAgriculturalScien ，L“订ho“730046，Chin) Abstract：TotalRNA wasextractedfrom yakperipheralblood lymphocytesstimulatedwith phytohe～ magglutinin(PHA)andlipopolysaccharide(LPS) ． TheYakinterferon一)，(YaklFN一)，)cDNAswereamplified byRT PCR．Onepairofprimersweredesigned to amplify the geneencodingYakIFN—y from pGEM—T～ YaklFN y，andcloneditintopET一30avector，namedpET 30aYaklFN一)， ． TheexpressedYakIFN—yprotein waspurifiedbyNiagarosege1．ThepurifiedexpressedproductwasanalyzedbySDS—PAGE andW estern～ blot．ThebiologicalcharacteristicsofYakIFN一)，(rYakIFN一)，)protein