免疫磁珠分离技术在微生物学检测中的应用.pdfVIP

· 1030· 中国生物制品学杂志2008年 11月第21卷第 11期 ChinJBiologicalsNovember2008，V0l_21No ． II 中国图书分类号 R392-33 文献标识码 A 文章编号 10tN．5503(2008}11．1030．03 【综述 】 免疫磁珠分离技术在微生物学检测中的应用 何小曼 综述 曾繁启 审校 【摘要 】 免疫磁珠分离技术(IMBs)是近年来国内外研究较多的一种新的免疫学技术。本文主要介绍了免疫磁珠分离技术 的基本原理及其在微生物学检测中的应用概况。 【关键词】 免疫磁珠分离技术；微生物学检测；PCR；磁酶免疫分析 免疫磁珠分离技术(ImmunomagneticbeadsseP— 2．磁珠分离后微生物的鉴定 arationtechniques，IMBS)是近年来国内外研究较多 磁珠分离后，结合磁珠上的细菌可直接在普通 的一种新的免疫学技术。目前该项技术在细胞分离、 显微镜下分析，也可用吖啶橙染色或荧光素标记后， 蛋 白质纯化、免疫学及微生物学检测等方面均取得 在荧光显微镜下观察，或将其直接(细菌不必与磁珠 了较大的进展。本文仅就免疫磁珠分离技术的基本 分离)接种到培养基中，分离培养，然后进行常规鉴 原理及其在微生物学检测中的应用作一简要概述。 定。也可结合ELISA方法、磁酶免疫分析法(IMBS． ELISA)进行检测。目前越来越多的研究者将免疫磁 1． 免疫磁珠分离技术的基本原理 珠分离技术与传统PCR(IMBS—PCR)、逆转录PCR 免疫磁珠分离技术是将免疫学反应的高度特异 (IMBS．RT．PCR)、套式PCR(IMBS．nestedPCR)或实 性与磁珠特有的磁响应性相结合的一种新的免疫学 时PCR(IMBS—Rea1．timePCR)结合进行鉴定。Uhlen 技术。其基本原理是利用人工合成的内含铁成分，可 等 j运用免疫磁珠和PCR原理，设计了一种固相分 被磁铁磁力所吸引，外有功能基团，可结合活性蛋白 析技术 ，通过比色法来测定DNA，称作固定型放大 质(抗体)的磁珠，作为抗体的载体。当磁珠上的抗体 核酸检测技术 (Detectionofimmobilizedamplified 与相应的微生物或特异性抗原物质结合后，则形成 nucleicacid，DIANA o应用该技术，可省略通常为排 抗原．抗体 磁珠免疫复合物，这种复合物具有较高 除背景干扰所要进行的电泳、内切酶谱 、杂交等步 的磁响应性，在磁铁磁力的作用下定向移动，使复合 骤。如果在靶区加入乳糖操纵子，然后同时扩增，即 物与其他物质分离，而达到分离、浓缩、纯化微生物 可进行定量分析。 或特异性抗原物质的目的，然后再对磁珠上的微生 物进行鉴定 。 3．免疫磁珠分离技术在微生物检测中的应用 免疫磁珠分离技术检测微生物可分为直接法和 3．I金黄葡萄球菌的检测：陈伶俐等 ¨]将人 lgG结 间接法。直接法是指将特异性抗体(单抗和多抗均可 合到磁珠上，用该磁珠对样品中的金黄葡萄球菌进 应用)直接连接到磁珠上(物理吸附或化学结合)，然 行了快速分离检验。取适量免疫磁珠，加入金黄葡萄 后加入待测样品(含待测微生物或抗原物质)，两者 球菌菌液中，磁场下分离磁珠，将分离前后的菌液及 结合后形成复合物，在磁力作用下与其他物质分离。 磁珠涂平板，并用大肠杆菌、自葡萄球菌等作对照。 间接法是指先将第二抗体(如羊抗 鼠或兔 IgG)连接 结果用此磁珠分离后，只有金黄葡萄球菌的浓度有 到磁珠上，使磁珠作为第二抗体的载体。检