偏肿拟栓菌Pseudotrametes gibbosa产漆酶的条件优化.pdfVIP

Mycosystema 菌 物 学 报 15November2008 ， 27(6)：940—946 jwxt@im accn ISSN1672—6472 CN11—5180Q @2008InstituteofMicrobiology，CAS，allrightsreserved 偏肿拟栓菌 Pseudotrametesgibbosa产漆酶的条件 优化 陈军 高大文 池玉杰 梁红 东北林业大学林学院 哈尔滨 150040 Optim ization of condition for producing laccase by Pseudotrametesgibbosa CHEN Jun GAO Da—Wen CHIYu-Jie LIANGHong SchoolofForestry，NortheastForestryUniversity，Harbin150040,China 漆酶是一类含铜的多酚氧化酶，广泛存在于真菌，尤其是 白腐真菌 (Thurston1994)， 是重要的产漆酶菌。由于漆酶能够催化许多芳香族化合物和广泛的作用底物，具有很大的 实际应用价值 。近年来，漆酶在造纸工业 (SealeyRagauskas1998)、食品工业 (Labatet a1．2000)等方面得到了重要的研究和应用，尤其是在环境保护这方面更是研究的热点，如 环境中有毒有害物质的降解 (Aktaseta1．2003)、染料脱色 (Couto2007)及土壤中杂芬油 类物质的去除 (Eggen1999)等许多方面，对于环境污染物的消除起着很大的作用。目前 已被广泛研究的白腐真菌Phanerochaetechrysosporium为生长在北美的种，在我国至今还 没发现，因此，在环境污染防治中，研究开发我国境内的白腐真菌具有重要理论意义和广 泛的应用价值 。 本文选用的白腐真菌一偏肿拟栓菌 Pseudotrametesgibbosa是从我国东北林区分离出 来的，其培养特性已被研究过 (池玉杰和潘学仁 2001)。作者在此基础上对此菌株产漆酶 基金项 目：国家自然科学基金 (No；教育部新世纪优秀人才资助计划项 目(No．ncet一05—0330) CorrespondauthorE—mail：gaodw@nefu．edu．cn 收稿 日期：2008．04—17，接受 日期：2008—06—11 Vo1．27No．6 941 的培养基和培养环境进行优化，以获得最佳产漆酶条件，为今后应用于环境污染治理提供 理论依据和技术支持。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1菌株来源：偏肿拟栓菌Pseudotrametesgibbosa的提供人和鉴定人是东北林业大学林 学院池玉杰，菌种保藏于东北林业大学林学院森林病虫病理实验室。 1．1．2主要试剂：2，2一连氮．二 (3．乙基苯并噻唑一6一磺酸)(ABTS)购于美国sigma公司。 I．I．3培养基：固体培养基：马玲薯200g／L，葡萄糖20g／L，琼脂2ogm，KH2PO43．ogm， MgSO41．5g／L，定容至 lL。液体培养基(TienKirk1988)：葡萄糖 10g／L，酒石酸铵0．44g／L， KH2PO40．2g／L，MgSO4O．05g／L，CaCI20．01gL／，吐温 801．0g／L，无机溶液 lml／L，维生素 溶液0．5ml／L，pH4．4(0．2mol／LHAc—NaAc)。无机溶液：MgSO47‘H203．0g／L，MnSO40．5g／L， NaC11．0g／L，FeSO4’7H200．1g／L，COSO40．1g／L，CaC120．082g／L，ZnSO40．1g／L，CuSO45‘H20 0．0lg／L，AIK(SO4)20．01g／L，H3BO30．01g／L，NaMoO40．01g／L。维生素溶液：生物素0．002g／L， 叶酸 0．002g／L，VB0．005g／L，VB20．005g／L，VB60．01gm，烟酸 0．005g／L。 1．2方法 1．2．1正交试验：对偏肿拟栓菌产漆酶的液体培养基采用四水平五因素正交试验，因素水平 见表 1，设计出L16(4)正交表。 表 1正交试验因素水平表 Table1Factor