大鼠窦房结组织切片制作方法及其在微波辐射致心脏损伤研究应用.pdfVIP

couldbea ofNSCLC ta唱et nl唧、，． potential words：HAb cell inte彘血gRNA；MMPs； Key 18G；Non．smalllungc趾cer；prognosis；small VEGF；Biolo舒behaViors 大鼠窦房结组织切片制作方法及其在微波辐射致心脏损伤研究中的 挫用应用 高亚兵刘艳青彭瑞云王丽峰左红艳董霁 张静姚斌伟王惠王水明徐新萍 军事医学科学院放射与辐射研究所实验病理研究室，北京，100850 窦房结(silloacrialnode，SAN)是心脏传导系统的重要组成部分，是哺乳动物心脏正常 节律的起搏点。大鼠是最常用的实验动物之一，其SAN解剖位置隐蔽，体积小，仅通过肉 眼观察难以发现，然而其在心脏自律性活动中却占有非常重要的位置。因此，大鼠SAN的 准确定位并清晰显示对SAN相关研究具有非常重要的意义。本实验通过解剖学定位和形态 学观察，进一步确定了窦房结的准确位置和形态，对探讨微波辐射对大鼠窦房结功能和组织 结构的影响提供实验依据。制备完整的窦房结标本是重要的环节之一，我们根据文献报道并 结合自己的体会对窦房结取材、制片和染色作一介绍。 材料与方法 1． 大鼠SAN光镜取材和固定 以1％戊巴比妥钠腹腔注射麻醉大鼠(50mg／l呜)，解剖胸腔，暴露心脏，在体原位寻找 大鼠右侧上(前)腔静脉，用O号缝线在静脉远心端打结做标记。然后沿上(前)腔静脉远 端、其它与心脏相连的大血管根部离断血管，取下完整心脏，以锐利剪刀剪下右心房及与之 相连的上(前)腔静脉，分离并去除上腔静脉周围的结缔组织，最后对取下组织进行进一步 修剪，以上(前)腔静脉与右心房交界区为中心(图1)，在向上向下各1．5衄处横断上腔 静脉与右心房，以滤纸包裹取好组织(防止组织折叠卷曲)入10％中性缓冲福尔马林固定。 固定后的组织常规脱水、透明、石蜡包埋(包埋方向：上腔静脉远端向下、静脉壁立埋)制 成SAN包埋蜡块。 257 缝线打结标记 上腔静脉 主动脉 右心房 右肺静脉 右心室 下腔静脉 右肺 圈I成年太鼠心脏右侧面观．示右上腔静脉打结标记部位。 2．大鼠sAN组织连续切片定位方法 切片过程中可用肉眼观察切片上的上腔静脉壁的形态，当静脉壁局部开始增宽，并且增宽处静脉 壁上出现明显动脉管腔时，此部位一般是SAN开始出现的部位，需要慢切，对切片进行快速HE染 色，光镜观察以证实是否含有sAN组织，咀备收集阳性组织切片。在含有窦房结细胞后可以进行 连续切片，大约每个大鼠心脏窦房结，从窦房结细胞开始出现到结束，最多能切到30一0张台右窦 房结切片，但如果保证窦房结的出现面积最大， 大约l5以0张左右。 3．大鼠sAN组织HE染色方法 盐酸酒精分色数秒，自来水冲洗反蓝lmm后，用蒸馏水稍洗，经伊红染液10s，蒸馏水冲洗，再经 最后经二甲苯(1、1I、Ⅲ)透明处理鲁10mm，中性树胶封片，光镜下观察SAN形态结构。 4．大鼠sAN组织M躯soⅡ三色染色法 石蜡切片按常规方法脱蜡至水，经R铭aIld苏木素液染5mm：95％己醇洗2次；在苦味酸乙醇液 中分色，流水冲洗；再经丽春红酸性品红染色5mm，用蒸馏水稍洗：经1％瞵钼酸溶液处理5mm， 不经水冼，直接用醋酸苯胺蓝复染5…，再经1％冰醋酸处理1一，然后经95％乙醇、无水乙醇脱 水多次，二甲苯透明，用中性树胶封片，于光镜下观察sAN形态结构。 实验结果 1大鼠sAN宏观定位结果 成年大鼠sAN位于上(前)腔静脉与右心房交界区及交界区以上的上