一种党参高质量总RNA的提取方法.pdfVIP

· 703 · 中国药物与临床 2012年 6月第 12卷第 6~ChineseRemedies ClinicsJune2012,Vo1．12,No．6 — — — — 一 种党参高质量总RNA的提取方法 王静芳 曹秋芬 高建平 【摘 要 】 目的 建立提取高质量党参叶片 RNA的有效方法。方法 以山西陵川(药材生产管理规范) GAP基地栽培党参为材料 ．分别用改良十六烷基三甲基溴化铵 (CTAB)法、Trizol试剂盒法和某公司RNA提取试 剂盒法提取党参总RNA．通过紫外光谱分析和甲醛变性凝胶电泳对提取的总RNA进行鉴定。结果 3种方法提 取的RNA差异有统计学意义：Trizol试剂盒法和某公司RNA提取试剂盒法所提总RNA完整性较差，且有小分 子盐类杂质，不能满足进一步的分子生物学研究；采用CTAB法提取的总RNA，经紫外光谱分析A： 瑚比值约 为2．0，A 23o2．0，电泳28S、18S条带清晰，比值为 1．5～2．0，经反转录一聚合酶链反应 (RT—PCR)检测，可以满 足下游分子生物学实验要求。结论 改良CIA’B法提取的总RNA完整性好、纯度高，是一种提取高质量党参叶 片总RNA的有效方法。 【关键词 】 党参属；中草药；总RNA提取 Anapproachforisolatinghigh-qualitytotalRNAfromCodonopsispff0lf AⅣGring-fang*,CA0Qiu GA0rian-ping．CollegeofTraditionalChinesePharmacy,ShanxMedicalUniversity,Taiyuan030001，China A【bstract】Objective Toestablishanefficientapproachforisolatinghigh—qualitytotalRNAfromleavesof codonopsispilosula． Methods TotalRNA from theleavesofCodonopsispilosulacuhivated in Lingchuan GAP plantingbaseofShanxiChina．wasisolatedwithmodifiedCATBmethod． TrizolmethodandtotalRNA isolationkit method． respectively． Uhravioletspectrophotometeranalysisandgelelectrophoresisindenaturingofrmaldehydea- garosegelswereusedtodetemr inetheisolate(1totalRNA． Results Significantdifferenceswerenoted amongthe RNAsisolatedinvariousways：totalRNAsisolatedbyTrizolmethodandtotalRNA isolationkitmethodshowedpoor integrityandsaltimpuritiesofmicromolecules． andthesetotalRNAsmaynotfulfillfurthermolecularbiologystudy． UltravioletspectrophotometeranalysisshowedthatthetotalRNA bymodifiedCTAB methodhadanA2∞ 280valueof 2．0， andA 2m2．O： theeleetrophoresispatternshowedthatthe28Sand 18SRNA bandswasclearandvisible witht