川产羌活种质资源的RAPD分析.pdfVIP

川产羌活种质资源的 RAPD 分析* 1 2* 1 2 2 3 唐学芳 ，蒋舜媛 ，孙辉 ，陈铁柱 ，周毅 ，马小军 1. 四川大学环境科学与工程系，成都（610065 ） 2. 四川省中医药科学院生药研究所，成都（610041 ） 3. 中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所，北京（100094) E-mail ：tangxuefang123@163.com 摘 要：本文用RAPD 方法选择15 个随机引物对33 株个体叶片DNA 进行扩增，在种内多 态性水平、个体间遗传关系及居群间遗传分化3 个方面对羌活的遗传结构进行分析，考察羌 活的遗传特征，探讨不同产地有形态变异的羌活（N.incisum ）种质资源的遗传多样性、遗传 分化。结果：（1 ）RAPD 共检测到 185 条谱带，其中 128 个位点为多态位点，羌活种内多态 性百分率为69.19% ，Nei’s 基因多样性为0.2237 ，Shannon’s 信息指数为0.3375；（2 ）紫秆、 绿秆、紫纹亚居群均按各自居群聚为一类，壤塘和九龙居群聚为一类，理县和泸定居群聚为 一类；（3 ）羌活居群内、亚居群间和居群间的变异分别占总变异的71.67 ％、4.52 ％和23.81 ％；（4 ）羌活居群间的遗传距离与地理距离间没有明显相关性（r= -0.1105 ，P =0.5855 ＞0.05 ）。 结论：本研究所用3 个指标均表明羌活种内遗传多样性水平较高；羌活的遗传变异主要分布 在居群内，但居群间已形成一定的遗传分化； 壤塘和九龙羌活个体间的遗传距离较小，各 自遗传背景较为相似。 关键词：羌活；RAPD；遗传多样性 中国分类号：R282.5 羌活（Notopterygium incisum Ting ex H. T. Chang ）是伞形科（Umbelliferae ）羌活属多年 生草本植物，我国特有种[1, 2]，是常用中药羌活（Rhizome et Radix Notopterygii ）的主要基源 植物，也是传统商品“川羌” 的主要来源。以干燥根茎和根入药，具有散寒祛风、除湿止痛的 功效，用于风寒感冒头痛、风湿麻痹、肩背酸痛等症[3] 。羌活分布于川西高山峡谷和川西北 高原、青海东南部、甘肃南部及西藏东南部等区域，生长在海拔 2500～4000m 的林缘、林 窗、疏林、沟谷草丛和灌丛下，以海拔3000~3700m 较集中，生长环境土壤有机质含量较高， 一般有枯枝落叶层和腐殖质层，通透性良好，容量较小，土质较疏松[4] 。由于长期依赖野生 采挖，资源及其原生境破坏严重，理县、小金等川羌的传统道地产区已资源枯竭。1987 年 即被国务院《中国野生药材资源保护管理条例》列为Ⅲ级保护物种，2005 年又载入《中国 物种红色名录》[5] 。 通常文献描述羌活花茎的颜色为紫色，我们在进行羌活种质资源收集整理中观察到相同 的生境下同时还存在绿色花秆，且性状稳定。以及紫色条纹的过度类型。 目前，对羌活的研究主要是化学成分，药理作用的研究，以及对该属植物地理分布、形 态学、孢粉学、分类学、环境土壤学、核型和驯化栽培等方面的研究[1~2, 5~9] ，但从DNA 分 子水平上对羌活群体遗传结构、遗传分化及多样性研究至今尚未见报道。RAPD 分子标记技 术作为一种简便、快速、易行的分子标记技术，近年来广泛应用于植物自然群体的遗传多样 性研究[10] 。本文利用RAPD 分子标记技术从DNA 分子水平上分析4 个地区羌活天然群体的 遗传多样性、群体内和群体间的遗传变异及其与生态因子的相关性，为合理保护、利用和开 发羌活遗传资源提供理论依据。 *本课题得到国家科技基础条件平台项目“药用植物种质资源标准化整理、整合及共享试点” （2005DKA21004 ）、国家环保总局 “中国重点药用生物资源调查”项目资助。 - 1 - 1 材料与方法 1.1 实验材料 2004 和 2006 年在四川甘