Ⅱ型胶原在骨关节炎软骨细胞中表达.pdfVIP

第二届泛长江流域骨科新进展研讨会·论文汇编 上海·2008 死取决于负荷的大小、持续时间，并且表层的软骨细胞相对于中层和深层的软骨细胞更加容 易受力学负荷的损伤(22)。 结论 人工合成的骨移植替代物已经被广泛应用于临床修复骨缺损。用骨水泥修复干骺端软骨 是修复软骨下骨缺损的良好材料。 Ⅱ型胶原在骨关节炎软骨细胞中的表达 马春辉1蔡国平2阎作勤3郭常安3张光健3 l上海交通大学附属第一人民医院骨科，上海，200080 2复旦大学附属金山医院骨科，上海，200540 3复旦大学附属中山医院骨科，上海，200032 【摘要】目的：比较骨关节炎患者软骨细胞与正常软骨细胞内II型胶原mRNA的表达情况， 探讨两类骨关节炎发病机制的异同。材料和方法：收集原发性骨关节炎、继发性骨关节炎的 关节软骨各8例，并以9例正常关节软骨作对照，采用逆转录／聚合酶链反应(reverse chain transcriptase／polymerase 细胞和正常软骨细胞中的表达情况。结果：原发性骨关节炎与继发性骨关节炎组II型胶原 关节炎组与继发性骨关节炎组间II型胶原mRNA的表达差异没有统计学意义(P--0．716)。 结论：软骨细胞内II型胶原表达的减少直接导致了II型胶原质和量的改变，是骨关节炎发病 的重要环节，是两类骨关节炎发病的共同途径。 关键词：骨关节炎；II型胶原；逆转录一聚合酶链反应：软骨细胞 发病机制目前仍不清楚，其发病机制的研究对于OA的防治至关重要。已知细胞外基质合成 与降解的平衡失调是引起OA的根本原因之一，胶原作为细胞外基质的重要组成部分在骨关 节炎的发病过程中占有重要的地位。有研究发现在OA的早期就有胶原退变的发生。目前的 研究认为，胶原的合成与软骨细胞II型胶原的表达密切相关，并受到多种因素的影响：胶原 的裂解破坏主要是由于各种原因导致的间质金属蛋白酶的升高。原发性OA与继发性OA在 发病的初始存在差异，这也是它们分类的标准，明确其发病过程中是否存在差异有利于OA 发病机制的探讨。本研究收集OA患者及正常人的软骨标本，采用RT-PCR技术对两类OA患 者及正常软骨细胞内II型胶原mRNA进行检测及数据分析，比较骨关节炎患者软骨细胞与正 常软骨细胞内II型胶原mRNA的表达情况，探讨两类骨关节炎发病过程的异同。 材料和方法 一、材料 MasterMix Trizol购自美[]lnvitrogen公司，逆转录试剂盒购自日本TOYOBO公司，PCR 购自晶美生物工程有限公司，II型胶原及内参p∞tin引物由上海生工生物工程有限公司代为 合成。 二、标本来源及处理 所有关节软骨均取自于上海中山医院行关节置换术的患者，标本离体后均用生理盐水冲 洗干净。所有样本均在离体后2小时内提取细胞总RNA并做冰冻切片(软骨组织厚度为 8岬)。冰冻切片于．20℃冰箱保存备用。 三、分组标准和分组情况 按照美国风湿病协会的诊断标准将OA患者归为原发性OA组和继发性OA组。原发性 218 第二届泛长江流域骨科新进展研讨会·论文汇编 上海·2008 OA组患者其骨关节炎发病没有明显的诱因和关节病史；继发性OA组其发病诱冈包括外伤、 骸关节发育不良、股骨头无菌性坏死；对照组关节软骨取自无关节炎表现而因其他原因行关 8 节置换术的患者。原发性OA8例，年龄648l岁，平均年龄71．25士6．27岁；继发性OA 68．1 1士21．71。各组间年龄差异无统计学意义。 四、关节软骨细胞II型胶原的mRNA表达 总RNA抽提：将全层软骨削成碎屑状，取300mg左右的软骨组织加入到10ml，质量浓 度为0．2％的II型胶原酶溶液中，置于可控温摇床上，于37℃振荡消化6小时，离心沉淀后 获取软骨细胞。将获得的软骨细