芦丁对衰老小鼠大脑皮质和海马NOS活性的影响.docVIP

　　芦丁对衰老小鼠大脑皮质和海马NOS活性的影响 　　【摘要】 目的 探讨芦丁（Rutin）的抗衰老作用及其可能机制。方法 选用健康的昆明小鼠60只，随机分为对照组、衰老组、阳性对照组、低剂量芦丁组和高剂量芦丁组。除对照组外，其他组小鼠通过注射D半乳糖制成亚急性衰老模型。选用阳性对照药物和两种剂量(20 mg/kg，40 mg/kg)芦丁对亚急性衰老模型小鼠治疗6 w。通过Y迷宫行为测试，光镜NADPHd组织化学法观察实验小鼠的学习行为变化及大脑皮质和海马结构NOS神经元的形态和数目。结果 衰老组小鼠Y迷宫学习次数明显多于其他组(P＜005)，高剂量芦丁组小鼠Y迷宫学习次数明显少于阳性对照组(P＜005)；两种剂量芦丁组皮质和海马结构NOS神经元数目较衰老组均增多(P＜005)，高剂量芦丁组海马CA1区和齿状回的NOS神经元数目较阳性对照组显著增多（P＜005)。结论 芦丁对衰老小鼠皮质和海马结构NOS活性有保护作用。 【关键词】 芦丁 一氧化氮合酶 D半乳糖 小鼠 芦丁是黄酮类化合物之一，广泛存在于天然植物中，具有抗脂质过氧化〔1，2〕的作用，给实验动物喂食芦丁、Vit E等能够延长其寿命〔3〕，还能抑制血小板活化，增强血管抵抗力〔4，5〕，对心、肾、脑等器官的缺血再灌注损伤具有保护作用〔6～9〕。临床上芦丁主要用于防治脑出血、高血压、视网膜出血、紫癜、急性出血性肾炎、治疗慢性气管炎和糖尿病肾病〔10〕等方面。此外，由于衰老过程与脂质过氧化、自由基等因素密切相关，而芦丁又具有良好的抗脂质过氧化作用，因此芦丁也具有抗衰老的作用〔11〕，但是芦丁能否延缓脑衰老尚待验证。本研究采用亚急性衰老模型小鼠进行芦丁延缓脑衰老作用的实验研究。 　　1 材料与方法 　　11 动物 选用健康的昆明小鼠60只，随机分为5组，即对照组、衰老组、阳性对照组、低剂量芦丁给药组、高剂量芦丁给药组。 　　12 方法 　　121 试剂与仪器 Y型小鼠迷宫(张家港生物医学仪器厂)；多聚甲醛(上海溶剂厂)；NADPHd反应液(Sigma)：芦丁(成都超人植化开发有限公司提供)；恒冷箱切片机(SAKURA CM501)；倒置显微镜(Nikon E800EFUV)。 　　122 模型的建立 用D半乳糖（Dgal 120 mg/kg)对实验小鼠皮下注射6周，建立衰老模型，Y迷宫实验验证。 　　123 给药方法 对照组皮下注射生理盐水0.5 ml/(d·只)，生理盐水灌胃05 ml/(d·只)；衰老组：皮下注射Dgal 05 ml/(d·只)，灌胃生理盐水05 ml/(d·只)；阳性对照组：皮下注射Dgal 05 ml/(d·只)，脑复康液灌胃05 ml/(d·只)（30 mg/kg）；低剂量芦丁给药组：皮下注射Dgal 05 ml/(d·只)，芦丁液灌胃05 ml/(d·只)（20 mg/kg）；高剂量芦丁给药组：皮下注射 Dgal 05 ml/(d·只)，芦丁液灌胃05 ml/(d·只)（40 mg/kg）。各组实验动物按上述方法处理6 w，普饲普水喂养。 　　124 行为学测试 采用Y迷宫实验，迷宫分为三臂。实验时两臂有光刺激无电刺激，一臂有电刺激无光刺激三臂连接处始终有电。将动物放入迷宫的有光、无电一臂适应60 s，切换光源，待动物进入有光无电处后开始记时，30 s时切换光源，如此进行切换20次。每次切换光源记作学习1次，每天每只动物学习20次，第20次切换后待动物进入有光无电处后适应30 s将动物取出。每只动物连续9次从无光有电处直接进入有光无电处为学会，第1天学不会者第2天继续学习，直至学会。将学会次数进行统计学分析。 　　125 样品制备 各组小鼠在相同条件下麻醉，开胸，快速经心脏灌注生理盐水100 ml，再用300 ml含4%多聚甲醛磷酸盐缓冲液灌注固定。取右侧脑入上述固定液后固定6 h(4 ℃)，再移入含20%蔗糖的磷酸盐缓冲液中至脑沉底(4 ℃)。冰冻切片机冠状位切片，片厚30 μm。 　　126 皮质和海马CA1、CA3、齿状回NOS活性 采用NADPH－d组化染色，间接显示NOS在皮质和海马的分布，以此确定NOS活性及NO的合成能力。切片移入NADPHd反应液，37 ℃孵育1 h，终止反应后裱片、脱水、透明、封片。每组选取对应断面的皮层和海马脑片各10张，光镜下分别对皮层及海马结构CA1区、CA3区和齿状回内所有NOS阳性神经元计数。 　　13 统计学处理 实验数据采用单因素方差分析（one wayANOVA）及两两比较的q检验，SPSS110统计软件处理数据。 　　2 结果 　　21 Y迷宫实验 与衰老组小鼠迷宫实