分子标记的开发及在柑橘种质鉴定应用.pdfVIP

分子标记的开发及在柑橘种质鉴定中的应用 胡威L2，张文L2，蒋巧巧3，龙桂友L2，曾柏全4，杨迎花5，李先信6’7， 李大志啦+，邓子牛1’2+ 学研究生院隆平分院，湖南长沙410125；7湖南省园艺研究所，湖南长沙410125) 摘要：DNA分子标记技术相对于传统的形态标记、细胞标记、生化标记而言具有快速准确，多态性高，直 接以DNA形式表现，不受外界环境、组织类别、发育时期等条件的影响等优点，正在逐步推广应用．本实验室开发 了柑橘的SRAP、ES■sSR、SCoT和ITs标记，并利用它们对宽皮柑橘资源遗传多样性、湖南柚类资源遗传多样性、 湖南甜橙类变异资源以及枸橼杂交后代鉴定进行了研究。 对影响柑橘分子标记反应体系的5种因素(M矿、dNTPs、引物、聚合酶及模板DNA)，在不同水平进行了优化筛 选。分别建立了适合宽皮柑橘、柚类、甜橙类及枸橼杂交种鉴定的不同分子标记反应体系，并筛选出了适合不同柑 引物用于枸橼杂种鉴定，l条SCoT和2条ITS标记引物用于甜橙类。 通过对25份宽皮柑橘及近缘种材料进行SRAP和EST-SSR分析，揭示出金榭与宽皮柑橘及印度野橘亲缘关系 较近。立花橘与臭皮柑、山下红、南柑20、吉品、砂糖橘之间有较近的亲缘关系；对14份温州蜜柑品种类别进行 分析，区分了由宫川变异而来的各品种；对14份宜昌橙类与香橙类进行分析，表明三叶宜昌橙比怀化宜昌橙、贵州 宜昌橙等更为原始：对35份地方种类品种和杂柑类型进行分析表明长沙南橘可能来自朱红橘．臭皮柑是原始的柑橘 类型，茶籽柑、蓝柑和本地宽柑，粗皮狗屎柑、细皮狗屎柑和大丰黄皮橘，砂糖橘、八月橘和尖叶型莽山野橘之间 亲缘关系较近。 对32份柚类资源的SRAP标记数据进行了统计分析，UPGMA聚类结果表明：相似系数0．68为临界值时，可 将32份试材分为4个组群，即沙田柚系列，文旦柚系列，甜橙类及野生资源。其中中秋蜜柚、慈利金香柚母株、脆 香甜柚等与珀溪蜜柚聚在一组，表明这几个地方品种亲缘关系较近且带有文旦柚血统：安江香柚、辰州香柚、菊花 心柚、江永香柚等与沙田柚聚在一组，表髓这几个地方品种含有沙田柚血缘；对收集到的24份天然柚类杂种的亲缘 关系进行SRAP分析，综合聚类分析结果与形态学性状的观测结果初步推断：无名柚、甜柚2号、菠萝香柚株系 2、水柚子、金瓜等自然杂种的亲本可能含有橙类． 对24份采集于湖南永兴、安江、溆浦等地的甜橙芽变株系进行分析，SRAP标记引物筛选结果表明其并不能区 分甜橙变异试材。以金兰柚、沙田柚、冰糖橙和大红甜橙为母本，枸橼为父本进行杂交育种，通过胚抢救技术得到 金兰柚x枸橼的后代为13株；沙田柚×枸橼的后代为27株；冰糖橙×枸橼的后代为359株；大红甜橙×枸橼的后代为 29株。利用SRAP分子标记鉴定出金兰柚的杂交后代为3株，沙田柚为5株，冰糖橙为ll株，大红甜橙为3株． 利用SCoT标记结合克降测序可以鉴别部分甜橙品种及其变异株系中的永兴冰糖橙，农大l号冰糖橙，农大2 号冰糖橙，8号冰糖橙，9号冰糖橙，永兴冰糖脐橙，安江冰糖脐橙，纽荷尔脐橙，普通甜橙，长形无核甜橙，大红 甜橙，哈姆林甜橙，朱红橘。利用ITS标记可以鉴别永兴冰糖橙、安江冰糖橙、永兴大果冰糖橙、锦玉冰糖橙、锦 红冰糖橙、农大l号冰糖橙、农大2号冰糖橙、8号冰糖橙、9号冰糖橙、ll号冰糖橙、安江冰糖脐橙、纽荷尔脐 橙、普通甜橙、长形无核甜橙、大红甜橙、哈姆林甜橙、兴农一号冰糖橙等甜橙变异株系以及安江香柚、朱红橘． 关键词：分子标记；柑橘；亲缘关系鉴定；杂种鉴定 Tel ’通讯作者(E-n诧ih盘n虹Q螋@l鳗。蛐TchEmail：．kiazhi@163．com 133