羊传染性脓疱病毒吉林株F1L基因的克隆和序列分析及重组腺病毒载体的构建.pdfVIP

中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第九次学术研讨会论文集 羊传染性脓疱病毒吉林株F1L基因的克隆与序列分析 及重组腺病毒载体的构建 王锴桦1,2，毛文智2，李琳2，白 翠2，邵洪泽p，胡桂学P (1．吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春130118；2．吉林省畜牧兽医科学研究院，吉林长春130062) Oll pMDl8-T载体中，测序获得长1 2载体，筛选阳性克隆并与腺病毒载体进行同源重组，电转化至 F1L基因差异不大。将F1L基因克隆至pShuttle DHl0B感受态细胞，PCR筛选阳性克隆，进行酶切、测序鉴定。结果表明，成功构建了携带羊传染性脓疱病毒 F1L基因的重组腺病毒栽体CTE434．1。本研究结果为羊传染性脓疱基因工程疫苗研究奠定了基础。 关键词：羊传染性脓疱病毒；F1L基因；克隆；序列分析；腺病毒载体 mouth构建了腺病毒载体，为进一步开展羊传染性脓疱病 羊传染性脓疱病俗称“羊口疮”(Sore vires，ORFV)疫苗研究奠定了基础。现将结果报告如下： disease)，是由传染性脓疱病毒(off 所致的主要危害羔羊的一种急性、病毒性、高度接 触性、嗜皮性人兽共患传染病。本病主要危害3“ 1材料和方法 月龄羔羊，常呈群发性流行，传染性强，发病率 高，继发感染的死亡率可达50％。吉林省主要养羊 区均有本病发生【1】，发病率在10％～20％，最高可课题组分离保存。 达80％，病死率在10％左右。 1．2 试验器材 3K30高速离心机、 Sigma 目前临床上尚无有效的药物用于羊传染性脓疱 Model DU@ LongGene 病的防治，疫苗接种一直是对该病进行免疫预防的 主要手段。但疫苗株毒力返强、活病毒逃逸、病毒 2020D电泳成像仪。 变异株的出现以及ORFV在免疫学上的特殊性等使1．3试剂细胞培养液(按常规方法配制)；U— 其不能提供完全保护。因此，羊传染性脓疱病频繁 暴发，并使得这些疫苗在临床上的应用受到限制【21。 GCBuffer 程(上海)有限公司；2x I(M薛+plus)、 F1L蛋白是ORFV单克隆抗体的主要结合位点，能dNTP mM DNA Mixture(2．5each)、Pfu Polymerase 够刺激机体产生中和抗体，同时也能引起细胞免 MiniBESTA- (2．5u／uL)、pMDl8一T载体、Takara 疫。所以，该蛋白被认为是刺激机体产生免疫应答 GelDNAExtractionKit garose 的主要免疫原蛋白。本实验对课题组分离的羊传染 MiniBESTDNA PurificationKitVer．3．0、 Fragment TaKaRa GelDNAPurificationKit 性脓