中国马传染性贫血病毒疫苗株FDDV穿膜蛋白TM截短突变.pdfVIP

中国畜牧兽医学 畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学 兽医免疫分 第七次研讨 会论文集 中国马传染性贫血病毒疫 株 FDDV 穿膜蛋白TM 的截短突变 马 建1，2 1 1 张 萍1 郭 亮1，2 1 1 1 1* ，郭 巍 ，赵立平 ， ， ， 登峰 ，孔宪刚 ，沈荣显 ，周建华 ( 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室/ 大动物传染病研究室/ 慢病毒及马病课题组， 黑龙江 哈尔滨 150001 ；2. 东北林业大学野生动物资源学院，黑龙江 哈尔滨 150040) 摘 要：本研究中，我 使用PCR 方法，对FDDV 感染的FDD 细胞中前病毒DNA 的 进行了扩增，将 PCR 产物进行 T-A 克隆，挑取，阳性克隆用于序列分析。结果表明，，在囊膜蛋白穿膜亚单位 TM 对应的gp45 基因区，病毒基因组env 的第2230 核苷酸位点出现 G →A 的突变，gp45 基因区提前出现了一个终止密码子 TGA ，即出现过早停止编码突变(Premature stop codon) ，造成gp45 基因对应的TM 蛋白的截短。Western blot 检 FDDV 的裂解产物中有截短型TM 的存在；用FDDV 接种了3 匹经琼脂免疫扩散检 确定为EIA 阴性的马 匹，在免疫后第 15 d 和40 d ，分别对免疫马匹外周血单个核细胞中EIAV 前病毒DNA 和血浆中游离病毒粒子 的基因组gp45 核酸序列进行了分析。研究结果定性地说明gp45 基因出现的过早停止编码突变并非致死性突 ， 。且这种病毒颗粒可以对马造成感染，并 变 其对应表达的胞浆区截短型TM 蛋白可参与构成完整的病毒粒子 可在体内进行长时间复制。 ； 关键词：马传染性贫血病毒 FDDV ；穿膜蛋白；截短突变 马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia [3] 成功 ，其作为唯一成功大规模诱导慢病毒免疫保 Virus ，EIAV) ，作为反转录病毒科慢病毒属的一员， 护的疫苗，理论和实际意义重大。探讨EIAV 疫苗 、 ， 在马属动物中引发以反复发热、血小板减少 消瘦 株致弱和诱导免疫保护的机制 将对慢病毒免疫研 为 要症状的传染性疾病—马传染性贫血病(EIA) [1] 。 究和制定疫苗研制策略提供有益的参考。 由于该病毒在病原学及致病机理等方面与同属病毒 阐明EIAV 的基因组特征，了解疫苗株进化的 HIV 的相似性，作为HIV 研究的动物模型一直受到 分子基础，对于探讨EIAV 致弱机制是必要的。已 相关领域研究人员的关注。 发表的研究表明，EIAV 基因组中的env 所对应表达 上世纪七十至八十年代，沈荣显等通过独特的 [5,6] 的囊膜蛋白与EIAV 的致病机制密切相关 。 EIAV 强毒致弱路线，对EIAV 强毒株进行致弱，获