转基因高油酸油菜TDNA插入拷贝数及整合位点分析.pdfVIP

分子植物育种，2011年，第9卷，第1期，第17-24页 MolecularPlant Breeding，2011，V01．9，No．1，17—24 研究论文 ResearchArticle 转基因高油酸油菜T．DNA插入拷贝数及整合位点分析 陈松‘张洁夫浦惠明 申爱娟周小婴龙卫华胡茂龙戚存扣 江苏省农业科学院经济作物研究所，南京，210014 +通讯作者，chenson91963@126．com 摘 要为获得转基因高油酸油菜T．DNA插入拷贝数及整合位点相关信息，本研究应用地高辛标记的NPTII 组序列；左边界旁侧序列长度为641 bp为W-4的基因组序列，276 bp，其中365 bp为载体序列。序列比对结果 发现该转基因事件中，T．DNA左边界序列完全整合到油菜基因组中，仅有1个碱基由G转换成了A。而右边界 则缺失了包括RB 体序列的整合。blast分析获得的与左右边界相连的油菜基因组序列，未检索到与之高度同源的序列，推测 贝数、整合特点和旁侧序列，研究结果为转基因油菜的生物安全性评价以及转基因高油酸油菜的检测提供重 要的基础信息。 关键词 转基因高油酸油菜，基因拷贝数，整合位点 T—DNAtoGenomeof of and Siteof AnalysisTransgeneCopyIntegration Transgenic L．) Hi曲Oelic(Brassicanapus ChertSo JiefuPu Shen Zhou WeihuaHu Qi ng‘Zhang HuimingAijuan XiaoyingLong Maolong Cunkou ’Correspondingauthor。chenson91963@126．tom IX)I：10．3969／mpb．009．000017 To the ofT-DNAintothe oleicacid Abstract Brassica investigatecopy integratedgenomeoftransgenichigh napus L．thesouthernblotwasconductedthe DNAfromtheT2 ofthe lineW一4． usinggenomic generationplants transgenic The was withBamHIthen witha ofNPTII labeledwith DNA and genomic digested probed segment gene Dig．The resultshowedthat one ofT-DNAwas intothe ofW～4．For the onlycopy integratedgenome isolatingflankingseq- uencetoboththe borderandtheleftborderT—DNAinthe thermal interlaced right ofthe genome，theasymmetric conductedthreeorfournested basedOnthe ofthe PCR(TAIL-PCR)Wasusing specificprimersdesigned