低氧有助于小鼠骨髓源间充质干细胞的定向分化.pdfVIP

2015经 2月 首 都 医 科 大 学 学 报 Feb．2015 第36卷 第 1期 JournalofCapitalMedicalUniversity V01．36 No．1 [doi：10．3969／j．issn．1006-7795．2015。01．OO4] · 血 管 外 科 专 题 · 低氧有助于小鼠骨髓源问充质干细胞的定向分化 黄 莹 张 建 陈 兵 郭连瑞 李建新 张淑文 (首都医科大学宣武医院血管外科 首都医科大学血管外科研究所 首都医科大学血管外科学系，北京 100053) 【摘要】 目的 本研究在测量小鼠体内股骨骨髓正常氧分压的基础上设定相应的体外低氧浓度 (3％)，研究低氧环境对小鼠骨 髓源间充质干细胞向内皮细胞系定向分化功能的影响。方法 用微电极测量正常小鼠股骨骨髓的氧分压，并以此为依据设定体 外培养的低氧浓度。将小鼠骨髓源单个核细胞置于3％(低氧)和20％(常氧)氧浓度下用内皮细胞专用培养基 (EGM-2)进行定 向诱导分化培养 ，培养至第2代进行Dil—Ac—LDL摄取实验和FITC-UEA结合实验双染色鉴定。对3％和20％氧浓度下培养的内 皮样细胞用 MTr法进行增生能力的鉴定；用荧光染色法对其进行黏附能力的比较。结果 小鼠股骨骨髓生理性氧分压浓度为 (21．554-3．40)mmHg(1mmHg=0．133kPa)，相当于(2．8-40．45)％氧体积分数(约为3％)。在不同氧浓度下培养的细胞 ，Dil— Ac．LDL摄取实验和FITC—UEA结合实验均为阳性。。MTr细胞增生实验显示低氧(3％)培养的细胞吸光度为0．31-40．05，常氧 (20％)培养的细胞吸光度为0．16±0．01(P0．01，n：5)。低氧培养的细胞，其黏附率为(8．72-42．95)％，常氧培养的内皮样 细胞，其黏附率为 (3．91-40．72)％(P0．05，n=5)。结论 3％的氧浓度是骨髓生理状态下的氧浓度。在此浓度下，骨髓源间 充质干细胞可被诱导分化为内皮样细胞。与常氧相比，低氧培养的内皮样细胞具有较高的增生和黏附能力。 【关键词】 氧分压；间充质干细胞；低氧 【中图分类号】 R459．6 Hypoxia contributes to directed differentiation of mice bone marrow derived mesenchymalstem cells HuangYing，ZhangJian ，ChenBing，GuoLianmi，LiJianxin，ZhangShuwen (DepartmentofVascularSurgery，XuanwuHospital，CapitalMedicalUniversity，VascularInstituteofCapitalMedicalUniversity， DepartmentofVascularSurgery，CapitalMedicalUniversity，Beijing100053，China) 【Abstract】 0bjective Tomonitortheintravitaloxygentensioninmicefemoralmarrow，andassesseffectofdifferentoxygentension onbonemarrowderivedmesenchymalstemcells(BM-MSCs)．Methods Oxygentensionofmicefemoralbonemarrowwasmonitoredby microelectrodetodeterminehypoxiclevelforex—vivocellculture．MiceBM-MSCswereobtainedbydensitygradientcentfifugationand culturedunder3％ oxygen(hypoxia)nad20％ (nomroxia)oxygeninendothelialgrowthmedia-2(EGM-2)．Dil—Ac—LDLandFITC—UEA absorbanceassayswere applied on 8 dayscuhure ofPassage 2．MTIproliferation and adhesion