精子DNA完整性分析技术和其在中医男科学研究的应用.pdfVIP

三结论 ①“阳化气，阴成形”是和精子DNA损伤的理论基础： ②补脾益肾是治疗弱精子症和精子DNA损伤的主要方法； ③疏肝和络是保证外肾“阳化气、阴成形”功能正常运行； ④活血和治湿法在治疗精子DNA损伤中起相辅作用。 四在探索中前进 l两个原则始终不变： ①以阳化气，阴成形理论为指导； ②始终顾护外。肾功能。 2探索治疗精子DNA损伤的过程始终是一个不断完善的过程。 精子DNA完整性分析技术及其在中医男科学研究的应用 陈建伟 崔云 浙江中医药大学附属宁波中医院(315010) 人类精子DNA是人类遗传信息的载体，对后代的繁衍具有重要意义。精子的DNA包括核 与基因突变、异位、缺失改变等进行检测分析。精子的DNA完整性对自然受孕、人工受精、胚胎、 婴儿乃至成人的发育至关重要。精液参数异常的不育夫妇DNA链断裂增加，同样的问题也发现在有 正常精液参数的不明原因不育患者中。精子DNA完整性分析可能是比传统精液分析参数更稳定、更 敏感的评估男性生育能力的指标(不管精液参数是否正常)。精子DNA完整性是准确传递遗传信息 的基础，精子染色质或DNA的任何损伤都可以导致男性不育，特别是当精子DNA损伤大于30％时， 生育能力将明显降低。近年来，精子DNA完整性成为生殖医学领域研究热点之一，检索国内外文献 未见精子DNA完整性分析对中医男科研究的报道，国内有对男性不育治疗的动物实验研究，但动物 模型与实际病情的病因病理符合程度，人与动物间的种属差异，致使实验结果的可信度难以确定151。 故笔者对精子DNA完整性分析技术在中医男科学的应用做一阐述。 精子DNA完整性检测技术 chromatin 1．精子染色质结构分析(sperm structureassay,SCSA) 光，与单链DNA结合发出红或黄色荧光，可以通过流式细胞仪进行分析。SCSA是检测精子DNA完整 性中使用较多的一种方法，被认为是检测精子DNA完整性的金标准。 2．彗星实验(Cometassay)。 cell 彗星实验又称单细胞凝胶电泳(singlegel 现断裂时，损伤DNA片段在电场力作用下向阳极迁移，从而形成“彗星”样拖尾，在荧光显微镜下进行观 察，根据彗星细胞的头、尾长度评估精子DNA的碎片化程度。 transferasemediateddUTPnick 3．末端转移酶介导的dUTP末端标记法(Terminaldeoxynucleotidyl endlabeling，TtYNEL)。 TUNEL的原理：使用末端转移酶将一段标记的核糖核酸连接到断裂的DNA片段的3’OH端，可以 在光镜下、荧光显微镜下观察，也可使用流式细胞仪检测。TI刷EL法可以检测凋亡所致的精子DNA 损伤。 4．精子染色体扩散实验(spermchromatindispersion，SCD)。 SCD的原理：没有DNA损伤的精子在经过酸变性和去掉核蛋白后DNA扩散形成特征性的光晕， 而带有DNA损伤的精子不会产生这种特征性的光晕，根据光晕的有无和大小判断精子的DNA损伤程 度。 insitu 5。荧光原位杂交技术(fluorescence hybridization，FISH) FISH是以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法。探针首先与介导分子结合， 杂交后再通过免疫化学过程连接上荧光染料，在核中或染色体上相应的DNA序列上显示杂交信号。 其最大优点是可以与间期细胞核杂交，测定染色体非整倍体率，这可以省去由细胞培养获取中期相的 150 麻烦，对一些体外不能分裂的细胞如人的成熟精子尤为合适。 6． 8一羟基脱氧呜舒(8一hydroxy-2一deoxyguanosine，8一OHdG)沙10定法 子DNA氧化损伤较理想的分子生物学标记物，可用米检测ROS对精子DNA氧化损伤程度。 7． chain