金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrD的原核表达及其抗体制备.pdfVIP

动物 医学进展 。2015，36(3)：1-5 ProgressinVeterinaryM edicine 笞 祭 劫 嗓研究论文 ＆ 髫 《 金黄色葡萄球菌表面蛋 白SdrD的原核表达及抗体制备 杜欣军，王学连，李 萍，耿洁洁，张洪娟 ，王 硕 (天津科技大学食品工程与生物技术学院，食品营养与安全教育部重点实验室，天津 300457) 摘 要：根据金黄色葡萄球菌表面蛋 白SdrD基 因序列设计特异性 引物，以金黄色葡萄球菌标准菌株基 因组为模板进行 PCR扩增 ，获得 了大小为2043bp的基 因片段 。将基 因片段连接至表达载体 pET26b，转 入大肠埃希茵BL21(DE3)中用IPTG诱导表达。SDs_PAGE结果表 明，SdrD基 因获得 了较好 的表达，重组 蛋白的分子质量约为99ku。利用免疫亲和层析对 目标蛋 白进行纯化，获得 了纯度较 高的 目标蛋 白。用该 蛋白免疫新西兰白兔制备 了多克隆抗体 ，抗体效价达到 1：23000，为金黄色葡萄球菌基 因工程疫苗的开发 与性能评价 ，以及该致病菌免疫检测技术的开发奠定了基础 。 关键词：金黄色葡萄球菌；表面蛋 白；SdrD基因；重组表达 ；抗体制备 中图分类号 ：$852．611；$852．4 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5O38(2O15)O3—0001—05 奶牛乳房炎 (Mastitis)在世界各 国都是影响牛 成 ，分别为 sdrC(2．8bp)、SdrD(3．9bp)和 sdrE 奶生产的最为重要的疾病之一_【1]，也是造成经济损 (3．5bp)_6]。虽然 SabatA等 研究表明并不是所 失最多的一种疾病 ，全球每年因乳房炎造成的损失 有 的金黄色葡萄球菌菌株都含有 sdrC、SdrD和 约为 350亿美元L2]。近年来 ，我 国奶牛产业 发展迅 sdrE基因，但是很多研究表明该类蛋 白能够起到较 速 ，但是 由于技术水平、养殖条件等方面 的限制 ，我 好的免疫保护作用 。Stranger—JonesYK等 ]研究 国因乳房炎造成的经济损失约 100亿元_l3]。金黄色 发现 ，用 IsdA、IsdB、SdrD和 SdrE蛋 白免疫小 鼠能 葡萄球菌是引起奶牛乳房炎最常见 的致病菌之一， 够获得很强 的免疫应答反应，4种表面蛋 白制备 的 可直接影响奶牛的产奶量 、奶品质 ，最终造成奶 品质 复合疫苗能够产生很高水平的保护作用。Becherel— 低下，甚至弃用 ，并因为投入巨大的医疗费用而造成 liM 等[8]研究指 出，3种 Sdr蛋 白(SdrC、SdrD和 经济损失[4]。金黄色葡萄球菌 已成为阻碍奶牛业发 SdrE)的保守结构域 CnaBE3(thethirdBrepeatof 展的一种重要危害因素 。 SdrE)对于金黄色葡萄球菌的感染具有 明显的免疫 金黄色葡萄球菌含有多种表面蛋 白，如凝集 因 保护作用 。此外 ，TradSJ等_9研究指 出，SdrD基 子 A(clumpingfactorA，ClfA)、凝集因子 B(clum— 因与骨感染有很大的关系。以上研究表 明，SdrD是 pingfactorB，ClfB)、胶原结合蛋 白(collagenadhe— 一 种重要的金黄色葡萄球 菌表面蛋 白，该蛋 白在基 sion，Cna)、纤连蛋 白结合蛋 白A(fibronectin—bind— 因工程疫苗开发 、检测技术建立及金黄色葡萄球菌 ingproteinA，FnBPA)、纤连蛋 白结合蛋 白B(fi— 致病机制的深入研究方面都具有重要的价值。 bronectin-bindingproteinB，FnBPB)、铁调节表面 本研究克隆了SdrD基因，对该基因进行 了原核 表达 ，并制备了多克隆抗体 ，为金黄色葡萄球菌保护 决定子A(iron—regulatedsurfaceproteinA，IsdA)、 铁调节表面决定子 B(iron—regulatedsurfaceprotein 性疫苗的开发 、免疫检测技术的建立奠定了基础。 B，IsdB)、丝氨酸一天冬氨酸重复蛋 白家族 (serin