基于一步法RT-PCR的瓜类单粒种子携带CGMMV的快速检测技术.pdfVIP

热带作物学报 2014，35(9)：1860—1865 ChineseJournalofTropicalCrops 基于一步法RT—PCR的瓜类单粒种子 携带CGMMV的快速检测技术 蒋庆琳 ．周国辉 z 1桂林市植物保护站．广西桂林 541213 2华南农业大学资源环境学院．广东广州 510642 摘 要 为探究直接检测瓜类单粒种子携带黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)的快速检测技术 ．以一步法 RT-PCR 为基础 ，构建 同时扩增 CGMMV基 因组 3端和 5端基因的(一步法)双重 RT—PCR、双重 IC—RT—PCR和巢式双重 IC—RT—PCR技术 ，灵敏度分别为 10-3、10-3、10 ，巢式双重 IC—RT—PCR灵敏度 比双重 RT—PCR、双重 IC—RT— PCR高 10倍 。对不 同种质、不同来源 的种子及种子 的不 同部位进行检 出率 比较 ，巢式双重 IC—RT—PCR检 出率 高于其它 2个检测技术 。试验种子种表带毒检出率高于种子组织研磨物 ．商用种子种表带毒检出率低于种子组 织研磨物。为有效阻断毒源，建议同时对种表和种子组织研磨物进行检测，种表采用双重 RT—PCR检测 ，种子 组织研磨物采用双重 IC～RT—PCR或巢式双重 IC—RT—PCR检测 关键词 黄瓜绿斑驳花叶病毒 ；双重 RT—PCR；双重 IC—RT-PCR；巢式双重 IC—RT-PCR；种子检测 中图分类号 s41—31 文献标识码 A RapidDetection ofCGMMV from IndividualCucurbitaceous SeedBased on One-step RT-PCR M ethods JIANGQinglin，ZHOUGuohui 1Guilin PlantProtection Station,Guilin,Gunagxi541213,China 2c0 ofResourcesandEnvironment，SouthChinaAgricuhuraUniversity,Guangzhou，Gunagdong510642，China Abstract A comparative study on three one—step RT—PCR—based methodsfor rapid detection ofCGMMV from individualCUCUrbitaceous seed iS presented．Specific primersbased on the 3 一 and 5 一terminalregions ofthe CGMMV genomewere screened and used for duplex RT—PCR．IC—RT—PCR．and nested—IC—RT—PCR detection． Theresultsshowedthatthesensitivitiesofthethreemehtodswere 10一．10-9and 10-4respectively．wiht theIatter methodbeing the mostsensitive．Thenested—IC—RT—PCR method had higherdetection rateshtan theothertwo methodsin the detection ofthe seedsfrom differentgermplasms．sourcesorpartsaswel1．In addition。theresuhs showed thatCGMMV detection ratesobtained from the Surface ofexperimentalseedswere higherthan those rfom ground seed tissue，and thatfrom hte surface of commercial seedswere lower than the latter．