鸭肠炎病毒ul47基因的原核表达及其抗血清中和活性的鉴定.pdfVIP

中国兽 医科学 2008，38(11)：946—95l ChineseVeterinaryScience 中图分类号 ：S852．659．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673—4696(2008)l10946—06 鸭肠炎病毒u147基因的原核表达及其抗血清 中和活性的鉴定 张 杨，刘峰源，乌伊罕，刘晓玫，王君伟 ，马 (东北农业大学 动物医学院，黑龙江 哈尔滨 l50030) 摘要：提取鸭肠炎病毒 (DEV)基因组 DNA，采用PCR方法扩增获得 了DEVul47基 因，将该基因片段 定向克隆到原核表达载体 pET一30a，构建重组质粒 pET一30a—ul47，并转化受体茵Rosetta(DE3)pLysS中，经 IPTG诱导表达 ，表达产物用SDS分析。结果显示，ul47基因在大肠杆菌Rosetta中获得与预期大小 相符的表达蛋白。利用Ni—NTA纯化表达蛋 白，制备 了免抗 DEVUI47蛋白的多克隆抗体，经琼脂双扩散 测定，该抗血清效价为 l：l6。间接免疫荧光试验和蚀斑减数 中和试验结果显示，DEVUIA7蛋白主要 定位 于感染细胞的细胞质和细胞膜 ，制备的兔抗 DEVUI47多克隆抗体对DEV 有中和活性。 关键词 ：鸭肠炎病毒；ul47基因；原核表达 ；间接免疫荧光试验；蚀斑减数中和试验 Prokaryoticexpression ofu147geneofduckenteritisvirus andidentificationofneutralizati0nactivityoftheantiserum againsttheexpressedproduct ZHANG Yang．IAU Fengyuan，W U Yihan，IAU Xiaomei，WANG Junwei，MA Bo (C0liegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China) Abstract：The “147genewasamplifiedbyPCR from theextractedduckenteritisvirus(DEV)genomic DNA ,andthenclonedintotheprokaryoticexpressionvectorpET 30a，andrecombinantexpressionplasmid DET一30a-u147wasconstrueted．ThetherecombinantsweretransformedintothehoststrainRosetta(DE3) PlysSandinducedbyIPTG．ThespecificproteinexpressionwasdetectedbySDSPAGE，andtheresultsin— dicatedthatDET一30a-A／147couldeffectivelyexpressUL47fusionprotein，andthefusion proteinwaspurl— fiedbyHisPurifyKit．Thepurifiedprotein wasused immunizerabbitsandproducedantibodyagainst UL47．Thetiterofantibodytestedbyagardiffusionreactionwas1：16．TheUI47proteinwasmainlylo— catedintheceIImembraneandcytoplasm ofinfectedcellswithDEV byindirectimmunofluorescenceand p1aquereduction neutralization test，and theanti—rabbitserum possessed neutralization activity against UL47antigen． Kevw0rds：duck enteritisvirus；ul47 gene；prokaryoticexpression；indirectimmunofluorescenttest； plaquereductionneutralizatio