鸭肠炎病毒UL6基因B细胞表位的预测及其主要抗原域的原核表达.pdfVIP

中国兽医科学 2008，38(11)：939945 ChineseVeterinaryScience 中图分类号 ：S852．659．1 文献标识码 ：A 文章编号 2008)11—093907 鸭肠炎病毒 UL6基因B细胞表位的预测及其 主要抗原域的原核表达 孙 涛 ，程安春 ，汪铭书 弘，郭宇飞 ，贾仁 勇。，沈婵娟。 (1．四川农业大学 动物医学院禽病防治研究中心，四川 雅安 625014；2．动物疫病与人类健康 四川省重点实验室 ，四川 雅安 625014) 摘要 ：采用DNAStarProtean程序 ，综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数 ，对鸭肠炎 病毒 (DEV)cHv毒株 uI6基 因(GenBank登录号 EF055890)的氨基酸序列进行 了B细胞表位预测。结果 显示，UI6蛋 白羧基端第 Thr507～Gln515、Thr521～Met529、Asp53l～Phe539、Gly544～Asn562、Thr568 ～ Gln585、Iys592～Va1604、A1a681～Ala778和 Tyr780～Iys790区域 内含有优 势 B细胞表位 。以DEV cHv毒株基 因组作为PCR模板 ，利用Oligo6．0软件设计了1对引物 ，整体扩增涵盖上述具有优势表位的基 因片段 ，将其亚克隆到原核表达载体 pET一32a(+)中，获得表达载体 pET一32a—UI6M，再将其转化至E．coli Rosetta(DE3)，经 IPTG诱导，外源基 因获得 了良好表达。以免抗 DEV 多克 隆血清进行 Westernblot分 析，抗血清可与该融合蛋 白发生特异性反应 。提示，该氨基酸片段可能含有软件预测的线性表位区。 关键词 ：鸭肠炎病毒；UI6基因；B细胞表位预测；抗原域 ；原核表达 Prediction ofepitopeson B cellofUL6geneofduckenteritisvirusand prokaryoticexpressionofmajorantigendeterminantsequence SUNTao ，CHENG An—chun 。，WANGMing—shu～，GU()Yufei。，JIA Ren—yong ，SHENChan—juan (1．AvianDiseasesResearchCenter，CollegeofVeterinaryMedicine，SichuanAgriculturalUniversity。Ya’an625014， China；2．KeyLaboratoryoJAnimalDiseaseandHumanHealthofSichuanProvince，Ya’an625014，China) Abstract：UsingDNAStarProteansoftware，theaminoacid sequenceencodedbyUI6gene(GenBank accessionnumberEF055890)ofduck enteritisvirus(DEV)CHVstrain wasanalyzedin secondarystruc— ture，hydrophilicity，flexibility and antigenic indexesto predictB cellepitopes．Many distinctantigen epitopesweresituatedintheC—terminalregionsofThrS07一 Gln515，Thr521一 Met529。Asp531一 Phe539。 Gly544一Asn562，Thr568一Gln585，Iys592一 Va1604，Ala68l— Ala778andTyr780一 Iys790．A fragment encodingUL6majorepitopeswasamplifiedbyPCRandsubclonedthesequenceintotheprokaryoticex— pression vectorpET 32a(+ )．TherecombinantplasmidpET一32a—UI6M wastransformedintoEscherichia coliRosetta(DE3)andexpressedundertheinductio